[发明专利]用于确定LRRK2抑制剂的试验

权利要求书

1.一种用于评估试验化合物对基于细胞的系统中的LRRK2的作用的方法，所述方法包括步骤：

a）评估将含有LRRK2的基于细胞的系统暴露于试验化合物中对LRRK2的Ser910和/或Ser935的磷酸化状态的作用；和/或

b）评估将含有LRRK2的基于细胞的系统暴露于试验化合物中对LRRK2与14-3-3多肽结合的作用。

2.根据权利要求1所述的方法，其中该方法包括，或进一步包括：评估将含有LRRK2的基于细胞的系统暴露于试验化合物中对LRRK2的亚细胞定位的作用的步骤。

3.根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括选择认为对基于细胞的系统中的LRRK2具有抑制作用的化合物的步骤，其中，如果LRRK2的Ser910和/或Ser935的磷酸化在暴露后降低；和/或LRRK2与14-3-3多肽的结合在暴露后降低；和/或胞质池中的LRRK2的蓄积在暴露后降低，则选择该试验化合物。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中，Ser910的磷酸化是使用特异性结合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗体或特异性结合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗体来评估的。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中，Ser935的磷酸化是使用特异性结合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗体或特异性结合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗体来评估的。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，LRRK2与14-3-3多肽的结合是使用荧光共振能量转移（FRET）评估的。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述基于细胞的系统为体外细胞系统。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述基于细胞的系统为离体细胞系统。

9.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述基于细胞的系统为体内系统。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，在试验动物中将所述包括LRRK2的基于细胞的系统暴露于试验化合物中。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，对取自试验动物的细胞进行对LRRK2的Ser910和/或Ser935的磷酸化状态的评估；和/或对LRRK2与14-3-3多肽结合的评估；和/或对胞质池中LRRK2蓄积的评估。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述取自试验动物的细胞为取自试验动物血液的细胞。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述基于细胞的系统为破碎的细胞系统。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述基于细胞的系统为基于淋巴样干细胞的系统。

15.特异性结合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗体；或特异性结合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗体；或特异性结合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗体；或特异性结合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗体。

16.包括两种或多种以下物质的试剂盒：

1）特异性结合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗体；或特异性结合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗体；

2）特异性结合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗体；或特异性结合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗体；

3）14-3-3多肽，或特异性结合于14-3-3多肽的抗体；和

4）荧光标记的LRRK2多肽，或编码荧光标记的LRRK2的多核苷酸。

17.以下物质在用于评估试验化合物对基于细胞的系统中的LRRK2的作用的方法中的应用：

1）特异性结合于Ser910磷酸化的LRRK2的抗体；或特异性结合于Ser910未磷酸化的LRRK2的抗体；

2）特异性结合于Ser935磷酸化的LRRK2的抗体；或特异性结合于Ser935未磷酸化的LRRK2的抗体；

3）14-3-3多肽，或特异性结合于14-3-3多肽的抗体；和/或

4）荧光标记的LRRK2多肽，或编码荧光标记的LRRK2的多核苷酸。