[发明专利]一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法。

背景技术

目前，消费者一致认为鲤鱼背部肌肉、腹部肌肉、尾部肌肉中，背部肌肉鲜嫩，得到消费者的青睐。这样，在鲤鱼生产和育种过程中，背部肌肉的选育和形成机理成为必须解决的首要问题。因此，如何从分子水平上区分雄性鲤鱼的背部肌肉显得尤为重要。

可从雄性鲤鱼背部肌肉、腹部肌肉、尾部肌肉中开发出鉴别背部肌肉的分子标记，可为胸肌区别与其它肌肉提供研究的突破口，同时可根据这个分子标记探寻用于雄性鲤背部肌肉进行选育的路径和方法。但是能够用蛋白检测的方法解决这个问题的研究还未见报道。

GAPDH（甘油醛-3-磷酸脱氢酶）是参与糖酵解的一种关键酶，由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。因为GAPDH 作为看家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的，因此在使用GAPDH内参抗体时，将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除，得到每个样品目的蛋白的相对含量，然后才进行样品与样品之间的比较。

发明内容

本发明的目的是提供一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法，可从雄性鲤鱼背部肌肉、腹部肌肉、尾部肌肉中鉴别出背部肌肉。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

一种可从雄性鲤3种不同部位肌肉中鉴别背部肌肉的方法，包括以下步骤：

1）提取雄鲤总RNA，用反转录试剂盒把RNA反转录成cDNA；

2）获得鲤鱼Cyprinus carpioBMP4基因cDNA序列：根据斑马鱼BMP4基因序列Genbank 登录号AF402958设计引物序列：

上游引物为：F：5’- gatacccgaggaagggaaga-3’；

下游引物为：R：5’- ggggtgtggctgccgctaaa -3’；

获得鲤鱼的BMP4的cDNA，并根据上述cDNA对应氨基酸序列设计多肽，合成多肽，并对多肽进行修饰获得鲤鱼BMP4多肽，其氨基酸序列为：

QVLLGESSYASLIPEEGKc，其中c为增加的cys，用于多肽偶联；

3）用鲤鱼BMP4多肽免疫新西兰大白兔，制备兔抗BMP4血清；

4）用BMP4多肽对兔血清进行抗原亲和纯化，纯化后获得鲤鱼BMP4多克隆抗体，抗体进行ELISA效价检测，结果显示，ELISA Titer大于1:128000；

5）用鲤鱼BMP4多克隆抗体western技术检测雄鲤鱼背部、腹部和尾部肌肉中BMP4基因的表达，结果显示雄性鲤鱼背部肌肉中有BMP4蛋白的表达，而在其它肌肉中没有检测到BMP4蛋白的表达，这样就可以从雄性鲤鱼肉中鉴别出背部肌肉。