[发明专利]一种缨小蜂体内共生沃尔巴克氏细菌的检测方法

权利要求书

1.一种缨小蜂体内共生沃尔巴克氏细菌的检测方法，包括： 提取缨小蜂总DNA； 扩增沃尔巴克氏细菌和细菌16S rDNA基因片段 对获得沃尔巴克氏细菌和细菌16S rDNA基因片段进行变性梯度凝胶电泳分析； 其特征在于：所述沃尔巴克氏细菌和细菌16S rDNA基因片段的扩增采用巢式PCR，其具体步骤为：（1）、以提取获得的缨小蜂DNA为模板，用沃尔巴克氏细菌的16S rDNA引物99F/994R或者315F/628R扩增获得相应的基因片段，用细菌的16S rDNA引物27F/1492R和27F/REUB分别扩增获得缨小蜂体内总细菌和不含沃尔巴克氏细菌的总细菌的相应基因片段。

2.根据权力要求1所述的方法，该方法还包括步骤（2）：以（1）中扩增获得的缨小蜂体内沃尔巴克氏细菌、总细菌、不含沃尔巴克氏细菌的总细菌的16S rDNA的基因片段为模板，采用带有GC夹子的细菌16S rDNA V₃高变区引物341F/517R扩增相应的用于变形梯度凝胶电泳分析的16S rDNA基因片段；所述扩增获得沃尔巴克氏细菌和细菌16S rDNA基因片段的变性梯度凝胶电泳分析在完全相同的条件下进行，以总细菌的DGGE图谱作为缨小蜂DNA的提取效果、沃尔巴克氏细菌的16S rDNA基因片段PCR扩增效果的控制性对照，且以沃尔巴克氏细菌的16S rDNA基因片段的DGGE图谱中条带的测序分析结果作为缨小蜂体内沃尔巴克氏细菌的检测结果。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述扩增获得的沃尔巴克氏细菌和细菌16S rDNA基因片段的变性梯度凝胶电泳分析结果中，以缨小蜂体内总细菌和不含沃尔巴克氏细菌的总细菌的相应基因片段的变性梯度凝胶电泳的图谱是否有条带的差异来初步判断缨小蜂体内是否存在沃尔巴克氏细菌。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，GC夹子的序列为SQ10。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，制备聚丙烯酰胺为所述的变性梯度胶，分析所用的聚丙烯酰胺胶浓度为8％（质量浓度），变性梯度为40 %－60 % ；100 %的变性剂包括7 mol/L的尿素和40 %的甲酰胺。