[发明专利]一种在体外研究昆虫共生菌经卵垂直传播的方法

摘要

本发明公开了一种在体外研究昆虫共生菌经卵垂直传播的方法。该方法首先将共生菌从昆虫体内取出离心纯化，得到共生菌悬液，然后解剖虫体获得卵巢，置于细胞培养基中，之后将纯化后的共生菌悬液加入到含有卵巢的细胞培养基中，进行共生菌和昆虫卵巢的共培养，最后在显微镜下观察共生菌进入卵巢的情况。本发明有助于在体外对昆虫共生菌经卵垂直传播的机制进行研究。

主权项

1.一种在体外研究昆虫共生菌经卵垂直传播的方法，其特征在于所述昆虫为半翅目类昆虫，且该方法包括以下操作步骤：（1）昆虫准备：用75%酒精对性成熟的雌成虫表面消毒5分钟后，再用无菌1×PBS清洗3遍备用，所述1×PBS为磷酸盐缓冲液，其pH = 6.4；（2）获取共生菌：将上述雌成虫置于无菌的1×PBS中，用消毒过的显微解剖镊小心剖开虫体腹部，在尽量不破坏虫体肠道的情况下，收集游离的共生菌；（3）共生菌的纯化：将步骤（2）得到的共生菌与Percoll分离液混匀得到含有70% Percoll的混合液，之后进行密度梯度离心纯化，最终获得共生菌悬液，并用血球计数板进行计数，计算共生菌悬液中共生菌的浓度；（4）离体卵巢的获得：取步骤（1）的成虫，置于无菌的1× PBS，用消毒过的显微解剖镊小心剖开虫体腹部，在尽量不破坏虫体肠道的情况下，获得卵巢，并用1×PBS清洗卵巢，之后将卵巢置于含有昆虫培养基的培养皿中；（5）共生菌与卵巢共培养：将步骤（3）纯化得到的共生菌悬液加入到步骤（4）所述的含有卵巢的培养皿中，进行共生菌与卵巢的共培养，培养温度为27℃，同时，以50转/分钟的速度旋转培养皿；（6）观察：共生菌与卵巢共培养1天后，在倒置显微镜下，观察共生菌进入卵巢的情况。