[发明专利]一种IgG含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药分析检测领域，特别涉及一种牛初乳中IgG含量的检测方法。

背景技术

牛初乳是母牛产仔后72小时内分泌的乳汁，在以往生产实践中，往往被当成没有作用的东西抛弃，在现今科学研究中证明，初乳中的IgG含量非常的高，可到达59-80mg/ml，有很高的利用价值。

目前国内主要的检测IgG含量的方法有：单项免疫扩散法、HPLC法、电泳法，但是精确度并不高，有着较大的误差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种精确度高、操作简单的IgG含量的检测方法。

一种IgG含量的检测方法，它包括如下步骤：

1、将标准IgG溶于缓冲液中配制成多个浓度的标准溶液，并分别检测每个标准溶液中的红细胞基数后制作标准曲线图；

2、将样品IgG与过量浓度的SPA混合反应，制备IgG-SPA复合物；

3、将IgG-SPA复合物与过量猪血清补体反应，产生的补体结合物与红细胞发生溶血反应，计算红细胞基数，与标准曲线对照即得样品IgG含量。

其中，优选地，所述步骤1中标准曲线图的制作方法如下：首先制备IgG标准溶液：在缓冲液中溶解IgG标准物质分别配制成为1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml的标准溶液，然后通过IgG-SPA结合反应及补体结合反应得到红细胞数量，从而制备标准曲线图。

其中，优选地，步骤2中制备IgG-SPA复合物的方法为：首先采用缓冲液配制与步骤1中标准溶液对应浓度的样品溶液，放入超声波清洗机中超声2-20min，精确吸取20-200ul样品备用；然后采用缓冲液配制5倍以上IgG样品溶液浓度的SPA溶液，放入超声波清洗机中超声2-20min，精确吸取20-200ul SPA备用；将备用的IgG与备用的SPA溶液进行对应混合，反应生成IgG-SPA复合物。

其中，优选地，步骤3中将IgG-SPA复合物与过量猪血清补体反应，产生的补体结合物与红细胞发生溶血反应的步骤为：首先采用缓冲液配制5倍以上IgG样品溶液浓度的血清补体溶液，放入超声波清洗机中超声2-20min，精确吸取20-200ul血清补体溶液备用；然后将步骤2中的IgG-SPA复合物与备用的血清补体溶液反应生成补体结合物；再精确吸取20-200ul补体结合物与标准红细胞发生溶血反应。

其中，优选地，所述的缓冲液为PH6.0的0.2mol/L磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer，PB)。

有益效果：本发明通过IgG分子的Fc段与SPA(Staphylococcal protein A)葡萄球菌A蛋白发生结合，产生的复合物可与标准猪血清中的补体发生补体结合反应，使特定浓度的红细胞标准液发生溶血反应，通过红细胞计数对比来检测IgG含量，该检测方法检测结果精确，成功弥补了IgG检测领域中不同检测方法误差大的缺点，能精确的检测初乳IgG的含量，对产品的开发和品质有着至关重要的作用，同样此方法可以应用到其他免疫蛋白的检测中，对其他生物制药行业及保健品行业有着重要的推动作用。

附图说明

图1为实施例1的标准曲线图，其以标准液浓度C(mg/ml)为横坐标，以红细胞基数N(个)为纵坐标，

其中，A点为实施例1中红细胞基数与对应浓度的坐标点；

图2为实施例2的标准曲线图，其以标准液浓度C(mg/ml)为横坐标，以红细胞基数N(个)为纵坐标，

其中，B点为实施例2中红细胞基数与对应浓度的坐标点；

图3为实施例3的标准曲线图，其以标准液浓度C(mg/ml)为横坐标，以红细胞基数N(个)为纵坐标，

其中，C点为实施例3中红细胞基数与对应浓度的坐标点。

具体实施方式

下述实施例中缓冲液的配制方法：0.2mol/L的磷酸氢二钠和0.2mol/L磷酸二氢钠，按照7∶1的体积比混合成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，PH值调至6.0。

标准IgG采用Sigma公司提供的纯度≥95％的IgG标准品。

IgG标准溶液采用标准IgG与磷酸盐缓冲液按照浓度1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.1mg/ml、0.05mg/ml分别配置。

实施例1

一种IgG含量的检测方法，其包括如下步骤：