[发明专利]一种基于电化学DNA生物传感器的Pb2+、Hg2+同时测定方法

权利要求书

1.一种基于电化学DNA生物传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于包括以下步骤：

(A)电极的预处理与活化：

将金电极在抛光布上用Al₂O₃粉末抛光至镜面，依次在乙醇和去离子水中超声，然后在H₂SO₄溶液中进行活化处理，用去离子水冲洗干净，用氮气吹干，即可得到表面干净的金电极。

(B)DNA修饰电极的制备：

将活化的金电极浸泡在一定浓度的杂化DNA溶液中，室温下静置4-5天。巯基修饰的DNA通过Au-S键作用自组装于金电极表面，得到DNA修饰电极。

(C)DNA生物传感器对不同单一金属离子体系的检测：

将DNA修饰电极在K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆]溶液中进行电化学阻抗测量，测完后用缓冲溶液淋洗，并分别放置在一定浓度的Hg²⁺、Pb²⁺、Co²⁺、Ca²⁺、Ni²⁺、Mg²⁺、Mn²⁺、Cu²⁺、Cd²⁺、Zn²⁺等溶液中作用，然后再进行电化学阻抗测量，比较作用前后阻抗值的变化。

(D)DNA生物传感器对Hg²⁺和Pb²⁺共存体系中的单独检测：

将DNA修饰电极分别依次放置在Hg²⁺+cysteine及Hg²⁺+cysteine+Pb²⁺溶液中，Pb²⁺+G-DNA及Pb²⁺+G-DNA+Hg²⁺溶液中作用，并分别对作用后的DNA修饰电极进行电化学阻抗测量，分别比较作用前后阻抗值的变化。

2.根据权利要求1所述一种基于电化学DNA传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于：步骤(A)所述抛光布为鹿皮抛光布，Al₂O₃粉末粒径为0.05μm，H₂SO₄浓度为1M。

3.根据权利要求1所述一种基于电化学DNA传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于：步骤(A)所述依次在乙醇、去离子水中超声，超声时间分别为3min。

4.根据权利要求1所述一种基于电化学DNA传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于：步骤(A)所述电极用去离子水冲洗后，用高纯N₂吹干。

5.根据权利要求1所述一种基于电化学DNA传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于：步骤(B)所述杂化DNA包含三部分：巯基修饰的DNA片段，Pb²⁺特异性识别酶DNAzyme，Hg²⁺特异性识别DNA片段substrate DNA。

6.根据权利要求1所述一种基于电化学DNA传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于：步骤(B)所述杂化DNA溶液的浓度为10/3μM，溶液为高离子强度的Tris-ClO₄缓冲溶液，pH＝7.4。

7.根据权利要求1所述一种基于电化学DNA传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于：步骤(B)所述DNA杂化的温度为常温，杂化时间为一天。

8.根据权利要求1所述一种基于电化学DNA传感器的Pb²⁺、Hg²⁺同时测定方法，其特征在于：步骤(B)所述杂化后DNA与金电极作用时间为4-5天，温度为室温。