[发明专利]人源凝血因子Ⅺ催化结构域的表达、纯化及结晶

说明书

技术领域：

本发明涉及医药、生物技术、结构生物学领域。 

背景技术：

人凝血因子XI(Human Coagulation factor XI，hFXI)是一种丝氨酸水解酶原，FXI在肝脏中合成，以两个相同的多肽链组成的二聚体形式分泌到血液中去，分子量约为160KD。FXI每条肽链由607个氨基酸组成，包括N端的重链和C端的轻链，重链包含4个Apple结构域，每个结构域含90-91个氨基酸，轻链含有催化结构域，由第370～607位的氨基酸组成。在传统的内源性凝血途径中，FXI是个关键的成份，当血管壁发生损伤，内皮下组织暴露，带负电荷的内皮下胶原纤维与FXII结合，在高分子量激肽原和激肽释放酶的参与下被活化为FXIIa，活化的FXIIa将FXI激活。在钙离子的存在下，活化的XIa又激活了凝血因子IX。激活的凝血因子IX与凝血因子VIII结合并在Ca²⁺和磷脂存在的条件下，激活凝血因子X，活化的凝血因子X再激活凝血酶，凝血酶又激活纤维蛋白原，从而最终导致血液凝固。近来研究发现，FXI也能被凝血酶激活，被激活的FXIa反过来又促进凝血酶的大量产生。 

血液凝血过程出现失调可能导致危及生命的疾病，如急性心肌梗死，肺栓塞和动脉或静脉形成血栓的造成中风。目前常用的抗凝血药物，包括肝素、低分子肝素与华法林，存在着严重的局限性，治疗时需要严格监测。而作为一种参与凝血途径放大阶段的酶，FXIa的活性调节不影响凝血途径的起始阶段，但能减少血栓形成，而且不会引起严重的出血负作用。抑制丝氨酸蛋白酶是一种技术上可行的方案，例如，通过基于结构的药物设计已经发现多种凝血因子X以及凝血酶的抑制剂，部分抑制剂已应用于临床治疗，并且有部分抑制剂已经开 始应用于临床治疗。因此，结合FXI的重要生理作用，FXI催化结构域可以作为重要的靶标开发新颖的抗凝血剂，用于预防和治疗血栓疾病。 

发明内容：

本发明的目的在于提供了一套完善的人凝血因子XI在巴斯德毕氏酵母体系中表达、纯化、活性测定以及体外蛋白结晶的技术方法。本发明表达的重组蛋白具有有活性，成本低，稳定性高，表达量高等特点。 

本发明采用如下技术方案： 

1、人凝血因子XI催化结构域突变体的表达方法，其特征在于：本突变体在巴斯德毕氏酵母体系中表达，并且包含如下步骤：