[发明专利]一种ActA促进未成熟卵母细胞体外成熟的方法无效
申请号: | 201110341755.4 | 申请日: | 2011-11-02 |
公开(公告)号: | CN102363766A | 公开(公告)日: | 2012-02-29 |
发明(设计)人: | 张西锋;李兰;张志鹏;沈伟 | 申请(专利权)人: | 青岛农业大学 |
主分类号: | C12N5/075 | 分类号: | C12N5/075 |
代理公司: | 青岛高晓专利事务所 37104 | 代理人: | 隋臻玮 |
地址: | 266109 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 acta 促进 未成熟 细胞 体外 成熟 方法 | ||
1.一种ActA促进未成熟卵母细胞体外成熟的方法,其特征在于按照如下步骤操作:第一步、腔前颗粒细胞的收集和培养:用出生后12~14天的小鼠,取出卵巢后,用消化酶消化成裸卵及颗粒细胞,收集颗粒细胞放入备好的生长液滴中培养24小时,培养条件是每个液滴100μl,37℃,5%CO2、饱和湿度的培养箱里,制成颗粒细胞层;第二步、12~14dpp卵母细胞的收集和培养:机械法分离出生后12~14天小鼠卵巢后,体视镜下刺碎并用消化酶消化,口吸管取出卵母细胞,然后挑出直径在55~65μm之间的卵母细胞,在生长培养液中培养,培养条件是37℃,5%CO2、饱和湿度的培养箱里,每隔2天换半液;以每个液滴20个卵母细胞放入培养24h后的颗粒细胞层上培养,在培养基中添加浓度为100ng/ml的ActA;第三步、卵母细胞的成熟培养:卵母细胞培养7天后,挑出没有凋亡的卵母细胞,以每个液滴20个,放入提前备好的培养液滴中,6cm培养皿,每个液滴100μl,37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱里培养过夜,在37℃,5%CO2,饱和湿度的培养箱里培养18h,统计卵母细胞成熟的比例;其中,第一步中生长液的配制:密理博高糖培养基;牛血清白蛋白3mg/ml;脂肪酸1mg/ml;1%胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠复合物;促卵泡素10mIU/ml;表皮生长因子5ng/ml;1%丙酮酸钠;1%青霉素和链霉素;第二步中卵母细胞生长培养液的配制:密理博高糖培养基;10%胎牛血清;1%胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠复合物;促卵泡素10mIU/ml;表皮生长因子5ng/ml;ActA 100ng/ml;1%丙酮酸钠;1%青霉素和链霉素;第三步中成熟培养液的配制:密理博高糖培养基;牛血清白蛋白3mg/ml;脂肪酸1mg/ml;1%胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠复合物;促卵泡素100mIU/ml;表皮生长因子1ng/ml;1%丙酮酸钠;1%青霉素和链霉素。
2.根据权利要求1所述的一种ActA促进未成熟卵母细胞体外成熟的方法,其特征在于所述消化酶含有0.25%胰酶,0.2%胶原酶IV和0.02%DNA消化酶I。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于青岛农业大学,未经青岛农业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201110341755.4/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。