[发明专利]细胞分散方法、细胞分散剂及细胞测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种细胞分散方法、细胞分散剂及细胞测定方法。具体来说是涉及一种将细胞培养中产生的细胞块和从生物体采集的细胞块分散的细胞分散方法、细胞分散剂及细胞测定方法。

背景技术：

从细胞培养物和宫颈部位采集的细胞会形成几个细胞凝集在一起的细胞块。因此，上述细胞用于显微镜观察(比如细胞诊断)或用流式细胞仪进行测定时，必须进行前处理，分散细胞块。

比如，专利文献1中，分散细胞块的方法公开的是使用胰蛋白酶等蛋白质分解酶的方法。然而，用蛋白质分解酶分散培养基中的细胞块时，会优先分解培养基中所含蛋白质。因此，细胞分散效果不充分。而且用蛋白质分解酶分散保存(固定)在酒精溶液中的细胞块时，细胞分散效果也不充分。

另一方面，用蛋白质分解酶分散磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中的细胞块时，蛋白质分解酶可以分散细胞块。但是，在长时间反应中，蛋白质分解酶会溶解细胞膜。分散像宫颈细胞那种含粘液附着细胞的细胞块时，蛋白质分解酶优先分解粘液。因此，细胞分散效果也不充分。

这种分散不充分的细胞或受破坏的细胞可能对显微镜观察(如细胞诊断)或流式细胞仪测定会有影响。

在先技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2005/038044号手册。

发明内容：

本发明正是针对上述情况，其目的是提供一种可以在降低对细胞的破坏的同时分散细胞块的细胞分散方法、细胞分散剂及用这些测定细胞的细胞测定方法。

本发明提供的细胞分散方法是一种将数个细胞凝集而成的细胞块在液体培养基中分离成单个细胞的分散方法，其特征在于，在液体培养基中混合细胞块和氟树脂粒子。本发明还提供一种用于分散细胞块的、含有氟树脂粒子的细胞分散剂。同时，本发明还提供一种细胞测定方法，其包括在液体培养基中将数个细胞凝聚而成的细胞块与氟树脂粒子混合的混合步骤以及用流式细胞仪测定上述混合步骤获得的混合物的步骤。

采用本发明的细胞分散方法、细胞分散剂及细胞测定方法，可以在降低对细胞的破坏的同时，分散细胞块。因此，采用本发明的细胞分散方法、细胞分散剂可以制备出适于显微镜观察(如细胞诊断)和流式细胞技术的测定试样。用这种细胞测定方法可以更好地运用流式细胞技术进行细胞测定。

附图说明：

图1为运用流式细胞法的细胞分析装置的结构框图；

图2为细胞分析装置内光学检测部件的结构图；

图3为实施例1在有氟树脂粒子的情况下搅拌获得的试样中的细胞的显微镜照片；

图4为参考例中在没有氟树脂粒子的情况下搅拌后细胞悬浮液中的细胞的显微镜照片；

图5为比较例1中与胰蛋白酶一起培养1.5小时后的细胞的显微镜照片；

图6为比较例1中与胰蛋白酶一起培养3小时后的细胞的显微镜照片；

图7为比较例1中与胰蛋白酶一起培养46小时后的细胞的显微镜照片；

图8为比较例2中用杵搅拌后的细胞悬浮液中的细胞的显微镜照片；

图9为比较例2中用杵搅拌后的细胞悬浮液中的细胞的显微镜照片；

图10为比较例2中用杵搅拌后的细胞悬浮液中的细胞胞核的染色图的显微镜照片；

图11为实施例2中在有氟树脂粒子的情况下搅拌所得试样中的细胞显微镜照片；

图12为实施例3在有氟树脂粒子情况下搅拌所得试样中的细胞显微镜照片；

图13为PTFE粒子浓度与单一细胞和细胞块各自的比例的关系图；

图14为有无PTFE粒子与单一细胞和细胞块各自的比例的关系图。

具体实施方式：

1.细胞分散方法

本发明的细胞分散方法是一种在液体培养基中将数个细胞凝集成的细胞块分离成单一细胞的分散方法，其特征在于将细胞块和氟树脂粒子在液体培养基中混合。

本说明书中所说的“细胞块”指数个细胞凝集而成的物质。在本发明中，比如可将轻蹭生物粘膜所采集的、因粘液凝集在一起的细胞作为细胞块使用。具体来说，细胞块包括轻蹭宫颈部、鼻腔和咽喉所采集的、含有细胞的物质等。在本发明中，也可以将数个细胞凝集而成的物质保存在酒精溶液中作为细胞块使用。还可以将从生物采集的细胞培养后所获得的细胞培养物作为细胞块使用。