[发明专利]一种聚己内酯降解菌株及其选育方法

权利要求书

1、一种聚己内酯降解菌株的选育方法，其特征是将采集的活性污泥放入组分为PCL0.15％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，NH₄Cl₂ 0.1％，CaCl₂·2H₂O 0.0005％，KH₂PO₄ 0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O1.194％，pH 6.8分离液体培养基中，置恒温摇床中振荡培养，直至浑浊的培养液变得澄清为止，取一定量的培养液，采用平板稀释涂布法进行分离，选菌落周围有明显透明圈的菌落进一步纯化；

将选择到的具有降解聚己内酯能力的菌株接种到固体斜面培养基上，该固体斜面培养基组分为PCL 0.15％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，NH₄Cl₂ 0.1％，CaCl₂·2H₂O 0.0005％，KH₂PO₄ 0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O 1.194％，琼脂2％，pH 6.8，培养至出现大量分生孢子；

以无菌水冲洗，将分生孢子冲洗入装有玻璃珠的三角瓶中，振荡，使分生孢子分散，显微镜检查，使孢子浓度为10⁶~10⁷个/ml；

灭菌平皿中装有分生孢子悬液，在磁力搅拌下用紫外灯照射，处理后的悬液在无菌室红灯照射下适当稀释；

取上述悬液涂布于固体平板培养基上，避光培养，选取单菌落，点植法培养，观察并定期测量菌落周围水解透明圈的大小，初步筛选水解透明圈较大的菌株；

根据初筛结果，从固体平板培养基平皿中挑取需要的单菌落接入同上固体斜面培养基，待长满后接入同上液体培养基中，摇瓶培养，通过检测发酵液中PCL解聚酶的活力进一步筛选。

2、按照权利要求1所述的一种聚己内酯降解菌株的选育方法，其特征是将采集的活性污泥放入组分为PCL 0.15％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，NH₄Cl₂ 0.1％，CaCl₂·2H₂O 0.0005％，KH₂PO₄0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O 1.194％，pH 6.8的分离液体培养基中，置恒温摇床中振荡培养，直至浑浊的培养液变得澄清为止，取一定量的培养液，采用平板稀释涂布法进行分离，选菌落周围有明显透明圈的菌落进一步纯化；

将选择到的具有降解PCL能力的菌株接种到固体斜面培养基上，固体斜面培养基组分为PCL 0.15％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，NH₄Cl₂ 0.1％，CaCl₂·2H₂O 0.0005％，KH₂PO₄ 0.554％，Na₂HPO₄·12H₂O1.194％，pH 6.8，另添加2％的琼脂，28℃培养6天至出现大量分生孢子；

以无菌水冲洗，将分生孢子冲洗入装有玻璃珠的三角瓶中，28℃振荡15min，使分生孢子分散，显微镜检查，使孢子浓度为10⁶~10⁷个/ml；

灭菌平皿中装有5ml分生孢子悬液，在磁力搅拌下用30W紫外灯，照射距离10cm照射，照射时间为20~80s，处理后的悬液在无菌室红灯照射下适当稀释；

取上述悬液0.1ml涂布于固体平板培养基上，避光培养3天，选取单菌落，点植法培养，观察并定期测量菌落周围水解透明圈的大小，初步筛选合适菌株；

根据初筛结果，从固体平板培养基平皿中挑取需要的单菌落接入同上固体斜面培养基，待长满后接入同上液体培养基中，28℃摇瓶培养120h。

3、按权利要求1、2所述的选育方法选育的聚己内酯降解菌株，该菌株为青霉(Penicillium.sp)YD0401-Ae，已于2008年1月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，地址：北京朝阳区大屯路，保藏号为CGMCC No.2344。