[发明专利]CTHRC1在肝癌诊断中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学特别是基因诊断领域，尤其是CTHRC-1蛋白在诊断肝 癌中的应用。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是世界上发生率和致死率较高 的恶性肿瘤之一，全世界每年新发HCC病人约50％在我国[1]。HCC的发生发展和 恶性转移机制是一个涉及多基因、多信号通路参与的复杂的网络调控体系。

哺乳动物CTHRC1(Collagen triple helix containing 1)基因最先是在+对 正常大鼠动脉和球状损伤动脉的差异表达序列筛选中发现的，它包含一个N端信 号肽、一段36个氨基酸的胶原三螺旋以及一个C端球状结构域[2]。在人和鼠中， 该基因的氨基酸序列具有92％的同源性[3]。但未见该受体与人肝癌细胞有任何 特异性的关联。

CTHRC1基因在大鼠动脉的损伤处，重塑的动脉外膜的成纤维细胞和新生内膜 的平滑肌细胞中都有短暂表达。在大鼠成纤维细胞中该基因的高表达会促进细胞 迁移并抑制I型胶原的合成[2]，从而提示CTHRC1通过限制胶原基质沉积和促进 细胞迁移参与了血管的损伤修复.而越来越多的证据表明，组织的修复与肿瘤发生 之间有很紧密的关联[4-6]。

CTHRC1基因与人类肿瘤的关系首先是在乳腺癌中被报导的，cDNA芯片和原位 杂交发现在乳腺癌的基质细胞中有该基因的mRNA的表达[7，8]。此后又有研究报 导在黑色素瘤中该基因也存在异常表达，并且对癌细胞的侵袭和转移起作用[3]。 已有许多报道证实，肿瘤微环境在肿瘤细胞的生长、侵袭和转移中有及其重要的 作用[9-11]。当CTHRC1蛋白在纤维原细胞中表达上调时，可以抑制I型胶原的合 成。CTHRC1可能是通过降低细胞外基质成分的合成，从而为肿瘤细胞的侵袭和转 移创造合适的细胞外环境。因此，CTHRC1基因可能在癌症诊断和癌症转移复发的 预防和治疗上具有良好的应用前景。

因此，本领域对于特定癌症的准确和特异性的检测有迫切的需求。

发明内容

因此，本发明的目的是提供能够准确诊断选自肝癌的诊断试剂盒、CTHRC-1 基因的诊断试剂盒的用途，以及体外检测其表达量的方法。

在本发明的一个方面，提供了CTHRC1核酸序列或蛋白在制备肝癌诊断试剂或 含有该诊断试剂的试剂盒中的用途。

在该方面的一个优选例中，肝癌诊断试剂是抗CTHRC1蛋白特异性抗体或 CTHRC1蛋白特异性核酸探针。

在本发明的另一个方面，提供了一种检测肝癌的方法，包括下列步骤：

a)将与放射性核素偶联的CTHRC1核酸探针输给动物；

b)检测所述核酸探针在体内的聚集；

c)所述聚集表明肝癌的存在。

在该方面的一个优选例中放射性核素是α-³²P。在另一个优选例中动物是人。

在本发明的另一个方面，提供了一种肝癌诊断试剂盒，该试剂盒含有容器， 所述容器中含有抗CTHRC1抗体；以及标签，说明所述试剂盒用于诊断肝癌。

在本发明的还有一个方面，提供了一种肝癌诊断试剂盒，其特征在于，该试 剂盒含有容器，其中含有含有CTHRC1特异性核酸探针；以及标签，所该签说明所 述试剂盒用于诊断肝癌。

本发明的另一个方面，提供了一种体外检测特异性CTHRC1蛋白表达的方法， 包括步骤：

用抗CTHRC1蛋白特异性抗体或CTHRC1特异性核酸探针与细胞样品反应，以 正常肝细胞为对照；

比较抗体或探针的结合量，其中高于对照的量表明该细胞为肝癌细胞，低于 或等于对照的量表明该细胞为正常细胞。

在该方面的一个优选例中，结合量是通过检测与探针或抗体偶联的可检测基 团测得的。

在该方面的另一个优选例中，所述可检测基团选自生色团、化学发光基团、 荧光团或同位素。

附图说明

图1显示了CTHRC1在肝癌细胞株中的表达情况。图1A是肝癌细胞株中的 RT-PCR分析结果。图1B是对应于图1A的柱状图。