[发明专利]多肽

说明书

本发明涉及通过病原微生物表达的抗原性多肽、包括所述抗原性多肽的疫苗和针对所述抗原性多肽的治疗性抗体。

背景

目前医药开发面对的一个问题是许多重要病原微生物的抗生素抗性菌株的进化。产生抗生素抗药性的病原生物的一个例子是金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌(S.aureus)是一种细菌，其正常生长环境是约20-40％的正常健康人的鼻粘膜上皮，也常在人的皮肤上发现，通常并不导致损害。然而，在某些情况下，特别是当皮肤破损时，该微生物可以导致感染。在医院里，病人可能做了外科手术和/或是服用了免疫抑制药物，这是医院中的一种特殊问题。由于病人们已经接受的治疗，他们对于金黄色葡萄球菌的感染更加容易受到伤害。近年来出现了金黄色葡萄球菌的抗性菌株。二甲氧基苯青霉素的抗性菌株开始流行起来，并且这些抗性菌株中的许多是也对若干其它抗生素具有抗性。目前尚无针对金黄色葡萄球菌的有效的免疫程序。

本发明涉及有效的疫苗成分和治疗剂，其针对避免或降低直接抗性的病原菌株的问题。

在土壤革兰氏阳性细菌枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)的染色体的大约4100个基因中，271个基因对于其生长是必要的(“必需的”)，并且其中23个在所述生物的生理学中的作用不明确(gcp，obg，ppaC-yybQ-，trmU，yacA，yacM，ydiB，ydiC，yjbN，ykqC，ylaN，yloQ，ylqF，ymdA，yneS，yphC，yqeH，yqeI，yqjK，yrvO，ysxC，ytaG，ywlC)(Kunst等人，1997)。迄今为止，由这些基因编码的同源蛋白被发现于另一种革兰氏阳性细菌，即人病原体金黄色葡萄球菌的各种菌株中。其中，Gcp和YneS的直向同源物被预测为膜蛋白(参见附录I)，而其余的则被预测为细胞质蛋白(数据未予显示)。不过，Obg已经显示出在枯草芽胞杆菌中是部分地与膜结合的(Kobayashi等人，2001)。

本发明人已经分离得到了一些多肽，所述多肽为该病原体枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌生长的必需成分，并且已经得到了抗这些多肽的抗血清。本发明人发现抗所述枯草芽孢杆菌多肽而产生的的抗血清会导致所述金黄色葡萄球菌被极其有效地杀灭。该作用是不能预测到的。

这些发现促进了疫苗和抗体治疗剂的开发，所述疫苗和抗体治疗剂能够减轻当前治疗剂中的一些问题，例如抗生素的抗性问题。

本发明公开内容的简短说明

本发明提供抗原性多肽，所述多肽对革兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的生长是必需的，并且被用于治疗或预防微生物的感染。

根据本发明的第一方面，本发明提供一种用作药物的抗原性多肽，或该多肽的部分，其通过分离的核酸序列编码，该分离的核酸序列选自：

i)如图1到6所示的核酸序列；

ii)(i)中的核酸序列，其编码通过病原生物表达的多肽；

iii)杂交到上述(i)或(ii)中定义的序列上的核酸序列；和

iv)由于在(i)、(ii)或(iii)中定义的核酸序列的遗传密码而简并的核酸序列。

在本发明的一个优选的方面，所述药物是疫苗。

编码本发明第一方面的抗原性多肽的核酸可以在严谨杂交条件下退火为图1至6中所示的核酸序列或退火为其互补链。

严谨杂交/洗涤的条件是所属技术领域中众所周知的。例如，在0.1×SSC，0.1％SDS中于60℃下洗涤后，核酸的杂交物是稳定的。本领域中众所周知的是，如果核酸序列是已知的，则其最佳的杂交条件是可以计算的。例如，杂交条件可通过要进行杂交的核酸的GC含量来确定。请参见Sambrook等人(1989)，Molecular Cloning；A Laboratory Approach。用于计算实现在规定同源性的核酸分子之间杂交所要求的严谨条件的常用公式的为：

T_m＝81.5℃+16.6Log[Na⁺]+0.41[％G+C]-0.63(％甲酰胺)。

编码本发明第一方面的抗原性多肽的核酸可以包括图1至6列出的序列，或者与图1至6的序列在核酸残基水平上至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％，例如98％或99％同源的序列。