本发明公开了一种紫花苜蓿MsNAP基因启动子及其应用,涉及生物技术领域中的豆科牧草。紫花苜蓿MsNAP基因启动子,其序列含有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列;其特异性引物包括:SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3;其表达载体为双酶切切除35S启动子后连接MsNAP的启动子序列的紫花苜蓿MsNAP基因启动子的应用是紫花苜蓿MsNAP的启动子序列或所述表达载体在调控植物的基因表达中的应用。本发明提供了MsNAP基因的启动子序列,并通过转基因技术对其功能进行验证,结果表明MsNAP启动子在衰老叶片中活性较强;为进一步探索调控紫花苜蓿衰老基因的表达,调控紫花苜蓿衰老奠定了基础。