本申请实施例属于生物技术领域,涉及一种抗人弹性蛋白酶抑制蛋白抗体、试剂盒及其制备方法和应用,包括重链可变区和轻链可变区,其中,重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,轻链可变区的氨基酸序列如本申请的抗人弹性蛋白酶抑制蛋白抗体具有亲和力高、特异性强的特点,相应的,采用上述抗人弹性蛋白酶抑制蛋白抗体制备的试剂盒在检测人弹性蛋白酶抑制蛋白上具有检测灵敏度高、时间短、高通量和对操作者要求低等特点。
本发明公开了一种灰略红链霉菌耐高温中性蛋白酶及其编码基因和应用。该蛋白酶基因从灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)克隆得到,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,上述编码的耐高温中性蛋白酶,其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。本发明通过在重组蛋白C端添加聚组氨酸标签(HIS6·Tag),保证了蛋白活性的同时,也便于蛋白酶的纯化。本发明的蛋白酶具有较宽的适用温度和pH范围,特别是在较高温度55℃下能表现出很好的酶活性;且对多种金属离子及酶活性抑制剂(EDTA、DTT、SDS和NaN3)均有较强的耐受能力。
本发明提供了一种前导序列定点突变的角蛋白酶,其具有(1)或(2)所示的氨基酸序列:(1)SEQ ID No.2所示的氨基酸序列;(2)SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由(1)衍生的蛋白质。本发明还提供了所述蛋白的编码基因及其应用。本发明所述的前导序列定点突变后的角蛋白酶基因sfp2可在链霉菌中高效表达。所述前导序列定点突变后角蛋白酶SFP2的比活是野生型角蛋白酶比活的9倍,前导序列定点突变后的角蛋白酶SFP2在链霉菌中的表达量为野生型角蛋白酶表达量的2倍,并且没有改变角蛋白酶SFP2的酶学特性和动力学参数