本文提供了第二链引导,其通过一种对测序平台特异性cDNA扩增子测序的方法实现,该方法包括:提供测序平台特异性扩增子,其中所述测序平台特异性扩增子包含双链多核苷酸,所述双链多核苷酸包含:i)包含SEQ IDNO:1的第一末端;ii)包含SEQ ID NO:2的第二末端;和iii)包含双链cDNA多核苷酸的中间区域,所述双链cDNA多核苷酸包含与mRNA序列互补的第一链cDNA多核苷酸,所述第一链cDNA多核苷酸与对应于所述mRNA序列的第二链cDNA多核苷酸杂交;并且用含有SEQ ID NO:8的第二测序引物从第二末端对扩增子测序。