本发明涉及蛋白质突变体,具体地涉及一种马来酸顺反异构酶突变体及其编码基因与应用。所述马来酸顺反异构酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示或经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由SEQ ID NO.4衍生的氨基酸序列。所述突变体与野生型马来酸顺反异构酶相比,具体的氨基酸序列的改变是:K51I(第51位赖氨酸变为异亮氨酸),R177S(第177位精氨酸变为丝氨酸),A212G(第212为丙氨酸变为甘氨酸)。经试验验证,该突变体的酶活力相对于野生型马来酸顺反异构酶提高了2.71倍。
本发明公开了一种马来酸顺反异构酶突变体,属于酶工程技术领域。本发明的马来酸顺反异构酶的突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,该突变酶的温度稳定性相比野生酶有了较大的提高,同时该突变体具有更好的pH稳定性。将构建得到的马来酸顺反异构酶突变体与天冬氨酸酶AspA在大肠杆菌中偶联表达,并以马来酸为底物生产L‑天冬氨酸,转化率可达94%以上,具有广阔的工业生产应用前景。