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[发明专利]一种制备β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶的方法及其专用菌株-CN201010110211.2无效
发明人：谷海先;张伟;许建立;毕建成 -专利权人：中诺生物科技发展江苏有限公司
申请日： 2010-02-20 - 公布日： 2010-08-04 - 主分类号： C12N9/38 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶的方法及其专用菌株。本发明提供的制备β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶的方法，包括如下步骤：诱导发酵巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)LACO Y12 CGMCC NO.3630，得到β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶。本发明的重组菌株具有非常高的产β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶能力，产率高，可达7000U/ml发酵液；本发明制备β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶的方法中，在发酵的过程中用高浓度的葡萄糖补料，使菌体增殖速度加快；减少了现有技术中碳源-甲醇混合饲喂的步骤，而代之以流加大量的甲醇，使菌产酶提前，即缩短了发酵周期；使用的复合微量元素与现有技术相比，种类少，用量少，大大降低了成本；将液态氨作为氮源，既降低了成本，又便于操作
一种制备半乳糖水解方法及其专用菌株

[发明专利]一种鲁棒有序的mRNA差异显示的方法-CN200910063161.4无效
发明人：丁毅;刘宏高 -专利权人：武汉大学
申请日： 2009-07-14 - 公布日： 2010-02-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：差异显示的方法，步骤是：A.提取总RNA，利用设计的带5′-端生物素标记和AcuI酶切位点的poly(T)引物反转录合成cDNA第一链，进一步用切口平移法合成双链；B.纯化回收cDNA，利用MspI进行酶切，再利用T4连接酶连接MspI接头；C.利用磁珠法分离带生物素的酶切片段，洗脱其余片段；D.利用AcuI对带生物素的酶切片段进行再次酶切，通过T4连接酶连接AcuI假接头；E.常规cDNA-AFLP的预扩增和选择性扩增
一种有序 mrna 差异显示方法

[发明专利]葡萄芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列的应用-CN201010582597.7无效
发明人：王跃进;徐伟荣;余义和;丁家华;周起 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2010-12-03 - 公布日： 2011-07-13 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明涉及中国葡萄属野生种华东葡萄芪合成酶病原菌诱导型启动子序列的应用，在人工接种葡萄白粉菌后，应用半定量RT-PCR法分析中国葡萄属野生种华东葡萄株系白河-35-1芪合成酶基因表达模式，克隆芪合成酶基因的cDNA序列与gDNA序列，设计特异引物，进一步分离获得了芪合成酶基因病原菌诱导型启动子序列1772bp，通过瞬时转化分析确定该启动子具有病原菌诱导表达特性，该启动子与所克隆的芪合成酶基因cDNA与gDNA序列融合，在转化植物中受病原菌诱导表达调控，增强了目标植物对病原菌的抗性，从中国葡萄属野生种这一特异资源中分离克隆芪合成酶基因启动子，对于填补国内空白及进一步应用于植物抗病改良，具有重要的意义。
葡萄合成基因病原菌诱导启动子序列应用

[发明专利]一种用棉籽油生产γ-亚麻酸的棉籽特异表达载体-CN201010045526.3无效
发明人：李冠;王贤磊;谢亚均 -专利权人：新疆大学
申请日： 2010-01-22 - 公布日： 2011-07-27 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明涉及一种植物转基因的表达载体，属于植物生物技术领域，本发明将棉花基因组中克隆的棉籽储藏蛋白启动子和紫草中克隆获得的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因通过酶切连接先后构建到pBI121植物表达载体，利用棉籽储藏蛋白启动子高效启动Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的转录表达。本发明中种子特异启动子的功能在模式植物拟南芥中得到验证，Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的功能也通过酵母表达得以验证，本发明可用于油料作物的转基因，在油料作物种子中特异表达γ-亚麻酸合成关键酶-Δ6-脂肪酸脱氢酶基因
一种棉籽油生产亚麻棉籽特异表达载体

[发明专利]新型复合生物酶洗毛剂及其制备方法-CN201010128756.6无效
发明人：张茂明 -专利权人：张茂明
申请日： 2010-03-22 - 公布日： 2010-08-18 - 主分类号： D06M16/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种新型复合生物酶洗毛剂及其制备方法，洗毛剂的原料组分及其重量份数分别为：复合酶制剂15～30份；脂肪醇助洗剂180～270份；其制备方法为：(1)将内切1，4-β-葡聚糖酶放入容器中，在10～15度下放置40～50分钟；(2)将外切纤维二糖水化酶放入容器中，在10～15度下充分搅拌40～50分钟；(3)将β-葡糖苷酶放入至容器中，在10～15度下充分搅拌40～50分钟后制得复合酶制剂；(4)在常温下将脂肪醇助洗剂与复合酶制剂充分搅拌15～20分钟后得到复合生物酶洗毛剂产品。本发明是由生物酶与脂肪醇类助洗剂相结合得到的复合生物酶洗毛剂，具有洗涤性能高、节能环保、制备方法简单可靠等特点，避免了对羊毛造成损伤的问题，有助于提高羊毛的加工质量。
新型复合生物酶洗毛剂及其制备方法

[发明专利]一种治疗糖尿病及肥胖症的新型口服复合胶囊制剂-CN200910188397.0无效
发明人：蔺新力 -专利权人：付金坤
申请日： 2009-11-03 - 公布日： 2011-05-11 - 主分类号： A61K38/55 文献下载
摘要：采用的技术方案是：一部分为有效药物胶囊，另一部分为蛋白酶抑制剂胶囊，将两部分胶囊压合后，再包覆一层肠溶胶囊，成为一个复合胶囊，所述的有效药物胶囊是胶囊内包覆蛋白药和助吸收赋形剂组成的混合物；蛋白酶抑制剂胶囊是胶囊内包覆蛋白酶抑制剂单位计量中，蛋白药为0.02-5.0毫克，助吸收赋形剂为20-150毫克，蛋白酶抑制剂300-600毫克。蛋白药是普兰林肽或艾格雷肽。助吸收赋形剂是牛黄去氧胆酸或月桂酰肉毒碱。蛋白酶抑制剂是柠檬酸。本发明生产成熟，便于口服用药，蛋白酶抑制剂和蛋白药的释放时间更易控制。
一种治疗糖尿病肥胖症新型口服复合胶囊制剂

[发明专利]一种脂肪酶的发酵生产方法-CN201310633763.5无效
发明人：曹天一;谭天伟 -专利权人：北京化工大学
申请日： 2013-11-29 - 公布日： 2014-03-26 - 主分类号： C12N9/20 文献下载
摘要：本发明涉及一种脂肪酶的发酵生产方法。该方法将产脂肪酶的假丝酵母和/或装载了含有LIP2基因的质粒的耶氏酵母作为发酵菌种加入发酵培养基进行发酵生产脂肪酶，并以发酵液中的丙酮酸为代谢标志物来控制发酵过程。该发酵工艺通过控制发酵液中作为代谢标志物的丙酮酸解除了脂肪酶合成过程中的抑制作用，从而提高了发酵菌种产生脂肪酶的能力。脂肪酶活力相比于原始发酵工艺（未添加维生素B68000IU/ml）提高了2000-4000IU/ml发酵液以上。
一种脂肪酶发酵生产方法

[发明专利]一种基于自诱导培养和有色底物相结合的高通量筛选重组菌的方法-CN201310505719.6无效
发明人：聂尧;徐岩 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-10-24 - 公布日： 2014-01-22 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：设计了一种可视化的高通量筛选表达普鲁兰酶重组菌的红色固体平板培养基，通过该筛选平板，获得稳定表达普鲁兰酶的重组菌株，其在液体LB培养基中能得到11U/mL的胞外重组普鲁兰酶酶活，SDS-PAGE分析发现目的蛋白表达正常通过菌落PCR和质粒双酶切方法，验证了筛选获得重组菌均含有正确的重组质粒。本发明能够直观准确的从退化菌种中筛选到表达稳定的重组菌株，具有可视化、直观、方便、高效等优点，为保持重组大肠杆菌生产胞外普鲁兰酶的稳定性提供了有效策略。
一种基于诱导培养有色相结合通量筛选重组方法

[发明专利]检验CYP3A4内含子SNP具有增强子和启动子功能的报告基因方法-CN201310518768.3无效
发明人：杨卫红;张莉蓉;杨鸽;韩圣娜;赵登职;闫良;王洋 -专利权人：郑州大学
申请日： 2013-10-29 - 公布日： 2014-01-22 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：内含子序列和验证该序列SNP同时具有增强子和启动子增强表达功能的检验CYP3A4内含子SNP具有增强子和启动子功能的报告基因方法，包括从人CYP3A4基因组中选择内含子序列、CYP3A4启动子序列荧光素酶报告基因质粒的构建、CYP3A4内含子SNP增强子荧光素酶报告基因载体的构建、CYP3A4内含子SNP启动子荧光素酶报告基因载体的构建、HepG2细胞培养和转染、双荧光素酶活性测定，应用本发明发现人CYP3A4内含子SNP同时具有增强子和启动子的功能，应用本发明可以筛选提高CYP3A4酶的产量的SNP，对进一步体外研究或筛选CYP3A4酶代谢的药物将具有重要的应用价值。
检验 cyp3a4 内含 snp 具有增强启动子功能报告基因方法

[发明专利]一种纺织品文物的专用洗涤剂及清洗方法-CN201310511703.6无效
发明人：周旸;赵丰;杨海亮;郑海玲 -专利权人：中国丝绸博物馆
申请日： 2013-10-25 - 公布日： 2014-03-05 - 主分类号： C11D1/66 文献下载
摘要：一种纺织品文物的专用洗涤剂及清洗方法，所述专用洗涤剂选用茶皂素、过硼酸钠、胰酶、脂肪酶、木瓜蛋白酶作为主料，配以柠檬酸、柠檬酸钠作为pH缓冲剂，按如下质量百分比加入水中，经混和后配制成专用洗涤剂溶液；所述的组份和配比是：茶皂素1.5-2.5%、过硼酸钠1-2%、胰酶1-2%、脂肪酶1-2%、木瓜蛋白酶1-2%、柠檬酸0.3-1.2%、柠檬酸钠0.1-1%和水85-95%；所述清洗方法包括如下步骤：A）将受到污染的纺织品文物浸入到专用洗涤剂的溶液中
一种纺织品文物专用洗涤剂清洗方法

[发明专利]聚乙二醇共价修饰的溶葡萄球菌酶及其制备方法和应用-CN201310041937.9无效
发明人：王永;刘翔;刘沐荣;张加慧;封小燕 -专利权人：杭州北望生物技术有限公司
申请日： 2013-02-04 - 公布日： 2013-06-05 - 主分类号： C12N9/96 文献下载
摘要：本发明涉及用聚乙二醇修饰的溶葡萄球菌酶及其制备方法和应用。聚乙二醇共价修饰的溶葡萄球菌酶，该溶葡萄球菌酶采用支化聚乙二醇对溶葡萄球菌酶进行修饰，支化聚乙二醇为含单一活性功能基团的Y型单甲氧基聚乙二醇，并且单一活性功能基团设置在端点，所述的含单一活性功能基团的Y2013100419379100004DEST_PATH_IMAGE002.GIF" wi="344" he="80" />；所述的n1、n2、n3分别为大于等于1的正整数，并且n1+n2+n3的总和为80~2000；所述的R为修饰溶葡萄球菌酶的活性功能基团本发明聚乙二醇修饰的溶葡萄球菌酶免疫原性降低，活性下降少，半衰期延长，适合临床应用于葡萄球菌引起的感染。
聚乙二醇共价修饰葡萄球菌及其制备方法应用

[发明专利]一种基于石墨烯的双酶葡萄糖传感器的制备方法-CN201210544926.8无效
发明人：邱军;王珊珊 -专利权人：同济大学
申请日： 2012-12-17 - 公布日： 2013-04-10 - 主分类号： G01N27/416 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于石墨烯的双酶葡萄糖传感器的制备方法，属于材料制备技术领域。本发明主要是将离子液体功能化修饰石墨烯改善其分散性，再将其与铂纳米粒子联用，以促进电子的传递，运用层层自组装法修饰到玻碳电极上，再利用生物信号增敏放大效应，结合葡萄糖氧化酶和辣根过氧化氢酶两种酶，在4℃下干燥24小时，使电极表面形成一层均匀的复合膜，制备双酶葡萄糖传感器，用于葡萄糖的快速电化学测定。本发明制备的纳米复合材料生物相容性好，利于生物酶的固定且制备方法成本低，简单快捷。
一种基于石墨葡萄糖传感器制备方法

[发明专利]一种改善土壤肥力的酶制剂组合物及其应用-CN201210191489.6无效
发明人：刘宝龙;吴鹏;宋宵因;赵路;赵岩 -专利权人：苏州昆蓝生物科技有限公司
申请日： 2012-06-12 - 公布日： 2012-10-24 - 主分类号： C12N9/00 文献下载
摘要：酶制剂组合物的特征在于，是由下述成分按酶活力进行组成：纤维素酶10000-50000u/g(QB 2583-2003，滤纸酶活力FPA)；蔗糖酶1000-3000mg/g(3，5-二硝基水杨酸比色法)；过氧化氢酶2000-10000mg/g(高锰酸钾滴定法)；土壤蛋白酶500-1000μg/g(加勒斯红法)；土壤磷酸酶500-1000mg/g(磷酸苯二钠比色法)。
一种改善土壤肥力酶制剂组合及其应用

[发明专利]一种新型非核糖体肽合成酶基因及其腺苷酰化结构域的克隆和表达-CN201210205929.9无效
发明人：陆勇军;周世宁;刘莉璇;黄雅莉;何磊 -专利权人：中山大学
申请日： 2012-06-20 - 公布日： 2012-10-10 - 主分类号： C12N15/61 文献下载
摘要：本发明公开一种新型非核糖体肽合成酶基因，所述非核糖体肽合成酶基因命名为NRPS114，所述非核糖体肽合成酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示；同时，本发明还公开了所述非核糖体肽合成酶基因的制备方法，含有非核糖体肽合成酶基因的质粒pCC1FOSTM Fosmid-NRPS114，以及所述非核糖体肽合成酶基因中的5个腺苷酰化结构域的重组质粒pET28a-A-2his的表达载体。
一种新型核糖体合成基因及其腺苷结构克隆表达

[发明专利]一种利用高地芽孢杆菌生产碱性蛋白酶的方法-CN201210144483.3无效
发明人：李盘欣;丁长河;陈复生 -专利权人：河南省南街村（集团）有限公司
申请日： 2012-05-11 - 公布日： 2012-09-19 - 主分类号： C12N9/54 文献下载
摘要：本发明涉及了一种利用高地芽孢杆菌生产碱性蛋白酶的方法。利用一株高地芽孢杆菌为碱性蛋白酶发酵菌种，采用培养基配方为每升液体培养基含有：豆粕40-80克，蔗糖30-70克，吐温-80 0.3-0.7克，葡萄糖20克，氯化钙0.7克，硫酸镁0.4克，氯化钾0.3采用高地芽孢杆菌为碱性蛋白酶发酵菌种；培养基配方中碱处理大豆粉、蔗糖和吐温80的添加对发酵液中碱性蛋白酶酶活的提高起到关键作用；大豆肽具有便于人体消化吸收、抗氧化、抗菌等功能特性，本发明生产的碱性蛋白酶适合应用于大豆肽生产
一种利用高地芽孢杆菌生产碱性蛋白酶方法