本发明公开了一种卤醇脱卤酶基因突变体及其应用。一种卤醇脱卤酶基因突变体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的卤醇脱卤酶氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。一种卤醇脱卤酶的制备方法，包括培养本发明所述的含有卤醇脱卤酶基因突变体的基因工程菌，获得重组表达的卤醇脱卤酶。利用本发明所述的卤醇脱卤酶基因突变体构建基因工程菌，并表达制备卤醇脱卤酶，以所述的卤醇脱卤酶为催化剂催化邻卤醇化合物脱卤素反应。将制得的卤醇脱卤酶应用于（R）-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生产，在相同的生产条件下，产品的产率也有较大提高，达到93.6%；且卤醇脱卤酶用量较少，仅为20.2kg，极大的降低了生产成本。
本发明提供一种脱卤素酶基因LinB、脱卤素酶、脱卤素酶基因工程菌及其构建方法和应用方法。其中，脱卤素酶基因LinB包括(a)SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；(b)编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核苷酸序列；或(c)，(a)或(b)的变异体。脱卤素酶包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽；SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；或其变异体。脱卤素酶基因工程菌的构建方法包括将脱卤素酶基因LinB克隆入重组表达载体，导入宿主细胞，获得能够表达脱卤素酶的脱卤素酶基因工程菌。
本发明公开了一种重组卤醇脱卤酶、突变体、工程菌及其应用，所述重组卤醇脱卤酶的氨基酸序列为SEQ ID No2所示；本发明还公开了重组卤醇脱卤酶及其突变体催化1,3‑二氯丙醇不对称脱卤合成(S)‑环氧氯丙烷及在制备其它手性环氧化物以及β‑取代醇的应用；相对于其它卤醇脱卤酶，本发明获得卤醇脱卤酶及其突变体具有更高的对映选择性，具有很好的工业应用前景。
本发明公开了溴苯腈还原脱卤酶基因簇bhbA2B2及其应用，属于应用环境微生物学领域。本发明提供了除草剂溴苯腈及其腈水解产物3,5‐二溴4‐羟基苯甲酸还原脱卤酶基因簇，核苷酸序列为SEQ ID NO.5，主要由细胞膜结合受体蛋白基因bhbB2和溴苯腈还原脱卤酶基因bhbA2构成，其中含有序列为SEQ ID NO.1所示的溴苯腈还原脱卤酶基因，为新的还原脱卤酶基因资源。利用该基因簇构建的功能互补菌株Comamonas sp.2B‐bhbA2B2能表达还原脱卤酶，可用于土壤、水体和农作物上的溴苯腈及其腈水解产物的还原脱卤。
本发明属于生物工程技术领域，尤其是涉及一种假单胞菌水解脱卤酶的编码基因、表达所述假单胞菌水解脱卤酶的重组表达载体、表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌、基因工程菌的发酵培养方法和利用表达假单胞菌水解脱卤酶的基因工程菌制备法匹拉韦中间体的方法假单胞菌水解脱卤酶基因序列如SEQ ID NO.1所示。与现有技术相比，本发明首次利用假单胞菌水解脱卤酶催化制备法匹拉韦中间体，并使假单胞菌水解脱卤酶基因能够在工程菌中实现高效表达。在优选条件下酶活性可以达到214.5U/L，催化制备法匹拉韦中间体效率高，底物转化率可达97.2％，具有较好的应用前景。
本发明公开了卤代烷烃脱卤酶及其在1,2,3‑三氯丙烷降解中的应用。本发明提供的卤代烷烃脱卤酶为氨基酸序列是SEQ ID NO.1的蛋白质。本发明的卤代烷烃脱卤酶对难降解、高毒性的1,2,3‑三氯丙烷具有较高的降解活性，反应2h可降解42.63％的1,2,3‑三氯丙烷，生物降解速率快；利用IPTG诱导重组菌表达卤代烷烃脱卤酶，表达5h即可获得较高的酶活性，重组菌表达卤代烷烃脱卤酶的速度更快、产量更高。本发明的卤代烷烃脱卤酶在较大的pH范围(3.0‑9.0)和温度范围内(25℃‑60℃)均具有较高的活性，具有较为宽泛的应用范围。
