本发明属于生物工程领域,公开了一种猴痘病毒特异性融合蛋白抗原及其制备方法和应用,所述猴痘病毒特异性融合蛋白抗原的氨基酸序列如Seq ID NO:1所示,上述猴痘病毒特异性融合蛋白抗原包括猴痘病毒B19R本发明还提供了表达该融合蛋白抗原的重组工程菌,并提供了该猴痘病毒特异性融合蛋白抗原的制备方法,该方法制备得到的猴痘病毒特异性融合蛋白抗原具有较好的抗原性和特异性,可准确区分猴痘和其他正痘病毒,可将其应用于制备猴痘病毒检测试剂盒、用于诱导针对猴痘病毒的免疫反应的药剂或用于预防猴痘病毒感染的药剂等,为猴痘病毒的快速诊断和国内猴痘病毒的疾病的防控提供了技术支持。