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[发明专利]无毛品系PLCD1基因敲除的转基因猪的构建方法-CN202110551022.7在审
发明人：顾为望;谢水林;邹芬;欧阳红生 -专利权人：广东明珠生物技术有限公司
申请日： 2021-05-20 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及无毛品系PLCD1基因敲除的转基因猪的构建方法。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，在西藏小型猪的PLCD1基因靶点设计了特异性的sgRNA，将Cas9mRNA和sgRNA混合物共同注射到西藏小型猪受精卵胞质内，并将注射后的基因修饰胚胎移植到代孕母猪输卵管为了获得足够多的用于显微注射的受精卵，本发明对西藏小型猪的超数排卵技术进行了初步实验研究，利用PMSG+hCG超排方案成功对西藏小型猪进行了超数排卵，通过手术法从西藏小型猪输卵管冲洗并采集到单细胞期受精卵，经超排和取卵手术后的西藏小型猪恢复良好，可以进行二次超排取卵实验。
品系 plcd1 基因转基因构建方法

[发明专利]一种猪卵透明带－3β蛋白的合成方法-CN200410077392.8无效
发明人：朱伟杰;谢秋玲;陈小佳;孙奋勇;李菁;洪岸 -专利权人：暨南大学
申请日： 2004-12-17 - 公布日： 2006-06-21 - 主分类号： C07K14/435 文献下载
摘要：一种猪卵透明带－3β蛋白的合成方法。猪卵透明带－3β蛋白与精卵反应有重要关系。抗pZP3β抗体能在体外与人卵透明带发生交叉反应，从而抑制人精卵结合，故其一直被看作是研制抗受精避孕疫苗的一个潜在抗原。而目前获得pZP3β的方法主要是采用生化提取技术直接从猪卵巢中提取，该种方法工艺复杂、成本昂贵、且不适于大量生产。本发明提供了一种工艺简单、成本低、适用于大规模生产猪卵透明带－3β蛋白的方法。
种猪透明蛋白合成方法

[实用新型]泥鳅产卵床-CN201220313841.4有效
发明人：李经武 -专利权人：桂阳县新城养殖专业合作社
申请日： 2012-07-02 - 公布日： 2013-01-16 - 主分类号： A01K61/00 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种泥鳅产卵床，包括底部置于养殖池水中的盛载鳅卵的滤布层，还包括置于滤布层上方的母卵隔离网，该母卵隔离网浸没养殖池水中，四周边沿伸出养殖池内的水面与养殖池壁固定连接。本实用新型由于设置了母卵隔离网，母体在母卵隔离网上产下的卵，从母卵隔离网漏落，集中在滤布层内，而母体被母卵隔离网隔开，因此母体无法吃到卵体，有效保证了卵体数量，提高了经济效益。在收集卵体时，直接收起母卵隔离网和卵体滤布层即可，使用更简单方便，制造成本低。
泥鳅产卵

[发明专利]一种猪ICSI操作的方法-CN201510038499.X有效
发明人：李奎;刘志国;魏迎辉 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2015-01-26 - 公布日： 2017-10-20 - 主分类号： C12N5/076 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪ICSI操作的方法。本发明的方法包括如下步骤(1)用脂酶或脂酶溶液水解离体动物精液的精子，收集水解产物，得到用于制备ICSI受精卵的精子。(2)将所述用于制备ICSI受精卵的精子注射到离体卵母细胞中，得到ICSI卵；(3)将所述ICSI卵进行电激活、培养，得到ICSI受精卵。该发明的方法不仅避免了因为加PVP而对猪精子的解聚、雄原核的形成以及后期的发育所造成的不良影响，而且对猪精子的质膜、顶体等区域造成破坏，有助于行ICSI操作后猪精子释放促卵母细胞活化因子，增加雄原核的形成率
种猪 icsi 操作方法

[发明专利]白化病模型猪的重构卵及其构建方法和模型猪的构建方法-CN201410438927.3有效
发明人：赖良学;信吉阁;杨化强;邹庆剑;樊娜娜 -专利权人：中国科学院广州生物医药与健康研究院
申请日： 2014-08-29 - 公布日： 2017-03-08 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种白化病模型猪的重构卵及其构建方法和模型猪的构建方法，该重构卵的构建方法通过敲除酪氨酸酶基因获得了白化小型猪的重构卵，且将CRISPR/Cas9基因敲除技术与体细胞核移植技术结合，证明该方法用于构建基因修饰猪的高效可行性获得TYR基因敲除猪具有典型白化特征，可为人类白化疾病研究提供一种可靠的动物模型，且能应用于毒性及过敏反应的检测等多方面，有望成为类似白化小鼠的一种标准化实验动物。
白化病模型重构卵及其构建方法

[发明专利]一种耳聋模型猪的重构卵及其构建方法，耳聋模型猪、构建方法及其应用-CN201910603387.2在审
发明人：曹新;姚俊;曾华沙;杨海元;王盈;邢光前;陈智斌;魏钦俊;鲁雅洁;戴一凡 -专利权人：南京医科大学;江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)
申请日： 2019-07-05 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种耳聋模型猪的重构卵及其构建方法，并公开了了一种耳聋模型猪、构建方法及其应用。本发明的耳聋模型猪的重构卵及其构建方法和模型猪的构建方法通过敲除猪OSBPL2基因获得了耳聋小型猪的重构卵，结合CRISPR/Cas9基因编辑技术、体细胞核移植技术和胚胎移植技术，证明该方法用于构建基因修饰的耳聋猪模型的高效性与可行性通过该方法可以精确复制人OSBPL2基因突变的基因型和耳聋表型，获得的OSBPL2基因敲除猪具有典型的人类常染色显性遗传性耳聋(DFNA67)的特征，可为人类遗传性耳聋的疾病研究提供可靠的大动物模型，并可应用于内耳的基因修复
耳聋构建重构内耳体细胞核移植技术人类遗传性耳聋胚胎移植技术遗传性耳聋基因敲除基因突变基因修复基因修饰疾病研究听力重建细胞再生大动物高效性基因型小型猪基因染色表型敲除应用复制

[发明专利]一种猪促卵胞激素β-亚基的编码基因FSHβ及其筛选方法-CN201410856926.0在审
发明人：李宁;李秋艳;王明;孙照霖;康倩倩 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2014-12-31 - 公布日： 2015-05-06 - 主分类号： C12N15/16 文献下载
摘要：本发明涉及一种猪促卵胞激素β-亚基的编码基因FSHβ，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过构建二花脸猪基因组BAC文库，获得猪促卵胞激素β-亚基的编码基因FSHβ全基因序列，并构建BAC真核表达载体，利用本发明所提供的方法构建的转基因猪可以进一步应用于与猪生殖及其产仔数的功能相关的研究
种猪促卵胞激素编码基因 fsh 及其筛选方法

[发明专利]一种猪促卵胞激素α-亚基的编码基因FSHα及其筛选方法-CN201410854498.8在审
发明人：李宁;李秋艳;王明;孙照霖;康倩倩 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2014-12-31 - 公布日： 2015-05-06 - 主分类号： C12N15/16 文献下载
摘要：本发明涉及一种猪促卵胞激素α-亚基的编码基因FSHα，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明通过构建二花脸猪基因组BAC文库，获得猪促卵胞激素α-亚基的编码基因FSHα全基因序列，并构建BAC真核表达载体，利用本发明所提供的方法构建的转基因猪可以进一步应用于与猪生殖及其产仔数的功能相关的研究
种猪促卵胞激素编码基因 fsh 及其筛选方法

[发明专利]一种收集猪复杂形态胚胎的方法-CN201611029628.X在审
发明人：孙瑞珍;刘忠华;雷蕾;单智焱;翁晓刚;申景岭 -专利权人：哈尔滨医科大学
申请日： 2016-11-14 - 公布日： 2017-03-08 - 主分类号： C12N5/073 文献下载
摘要：本发明公开了一种收集猪复杂形态胚胎的方法，属于兽医学技术领域。本发明根据猪子宫的形态特征和利用重力的原理建立了一种能够简易快速的收集猪孵化后球形、卵圆、管状及线性等复杂形态胚胎的方法。该方法可避免对球形、卵圆、管状及线性胚胎胚外组织的损坏，有利于观察复杂的猪胚胎形态，为猪孵化后胚胎及胚外组织的研究具有重要的意义。
一种收集复杂形态胚胎方法

[发明专利]一种红螯螯虾的工厂化繁育方法-CN201911414082.3在审
发明人：周剑;黄志鹏;李强;张露;柯红雨;刘超;肖宇;苏旭涛 -专利权人：四川省农业科学院水产研究所（四川省水产研究所）
申请日： 2019-12-31 - 公布日： 2020-04-17 - 主分类号： A01K61/59 文献下载
摘要：本发明公开了一种红螯螯虾的工厂化繁育方法，包括以下步骤：将雌雄红螯螯虾亲虾，放养于繁殖池中；红螯螯虾受精卵颜色变化顺序为豆黄色、深褐色、橙色、深橙红色，选择受精卵发育到深橙红色的抱卵母虾，将其单独放置，进行分隔操作；经过自然交配，收集抱卵母虾放入孵化池进行孵化；将挑选出的受精卵处特定发育时期的抱卵母虾，每只单独放进透明塑料盒中，并且封闭塑料盒限制抱卵母虾的活动；将已放入孵化盒的抱卵母虾进一步细分，根据其怀卵量、卵发育成熟度条件，在每个标粗池中放入合适密度的抱卵母虾。
一种红螯螯虾工厂繁育方法

[发明专利]猪卵丘干细胞的分离方法-CN201110204169.5无效
发明人：曹鸿国;章孝荣;蒲勇;杨盼;张运海;刘亚;陶勇;方富贵;李运生;任春环;张子军;丁建平;刘洪瑜 -专利权人：安徽农业大学
申请日： 2011-07-20 - 公布日： 2011-12-07 - 主分类号： C12N5/074 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪卵丘干细胞的分离方法。其方法是抽取青年母猪卵丘卵母细胞复合物，卵母细胞体外成熟培养后，消化脱离卵丘细胞，收集消化的卵丘细胞进行培养，待有细胞集落出现并形成较大的细胞集落后，消化传代接种到饲养层上，在含有细胞因子的培养液中进行培养，分离培养的卵丘干细胞具有鸟巢状细胞生长形态，细胞圆形、核较大，细胞表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog、SSEA1，体外分化能够形成来源于三个胚层的神经细胞、肌肉细胞和肝脏细胞，结果显示从猪卵丘细胞中分离培养了卵丘干细胞
猪卵丘干细胞分离方法

[发明专利]转移基因的动物-CN88102871.1无效
发明人：罗伯特·西马克;朱利安·R·E·威尔斯 -专利权人：路明尼斯有限公司
申请日： 1988-04-13 - 公布日： 1989-01-11 - 主分类号： C12N15/00 文献下载
摘要：一种创造动物新品种的方法，其包括(a)得到新近受精的卵；(b)分离与卵同源的特征化激素的基因样品；(c)将基因样品引入卵的雄性核内，然后使之与雌性核融合以形成一单细胞胚胎；以及(d)再将卵植入适当制备的雌性动物体内其中，在一优选方法中使用了包含一质粒克隆载体的质粒表达载体，其包括编码非猪启动子区之DNA的第一克隆序列以及编码猪生长激素活性的第二克隆序列。
转移基因动物

[发明专利]一种提取猪蛔虫受精卵基因组DNA的方法-CN201610850427.X在审
发明人：周春花;邓仕标;石琴华 -专利权人：南昌大学
申请日： 2016-09-27 - 公布日： 2017-02-22 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：一种高效提取猪蛔虫受精卵基因组DNA的方法，包括蒸馏水洗虫卵、预处理虫卵、蛋白酶K消化、除杂质、高纯水洗脱DNA等五个步骤。本发明提取的猪蛔虫受精卵基因组DNA，质量稳定，能有效地进行下游PCR扩增，为猪蛔虫的分子流行病学、遗传多样性、遗传结构、系统发生学、谱系地理学研究提供重要的技术方法，该发明对猪蛔虫病的分子诊断和防控也有重要意义
一种提取蛔虫受精卵基因组 dna 方法

[发明专利]一种猪小有腔的卵丘卵母细胞复合体的收集方法-CN201811027903.3在审
发明人：曹祖兵;高迪;许腾腾;王怡青;童旭;张丹丹;张运海 -专利权人：安徽农业大学
申请日： 2018-09-04 - 公布日： 2019-01-01 - 主分类号： C12N5/075 文献下载
摘要：本发明公开了一种猪小有腔的卵丘卵母细胞复合体的收集方法，以猪的卵巢为原材料，通过卵巢采集、器材消毒、卵泡吸取、卵母细胞收集等步骤，收集卵母细胞的效果最佳，回收效率最高，能够充分利用手中现有的资源，简单、经济、高效的回收猪小有腔卵泡的卵泡液以及卵丘卵母细胞复合体，对于今后有关于猪小有腔卵泡中的卵母细胞发育的研究以及畜牧业的发展提供了丰富的材料。
卵丘卵母细胞复合体卵泡卵巢卵母细胞种猪卵母细胞发育回收卵泡液消毒畜牧业采集器材研究

[发明专利]采集猪早期胚胎或卵母细胞的器械及采集方法-CN201010112198.4无效
发明人：刘西梅;李莉;乔宪凤;肖红卫;魏庆信;华文君;熊忠良;程妮;华再东 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2010-02-23 - 公布日： 2010-08-11 - 主分类号： A61D1/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于采集猪早期胚胎或卵母细胞的器械及采集方法，器械包括冲卵器和集卵管。冲卵器是长200-300mm、外径1.0-1.1mm、管壁0.08-0.1mm的胶质软管，软管的一端为9-12号针头，另一端与注射器连接。进行采集猪早期胚胎或卵母细胞时，首先将集卵管的一端从输卵管伞口插入输卵管10-15mm，另一端接集卵皿；然后将吸有15-20ml冲卵液、5-10ml空气的注射器与冲卵器连接，冲卵器的针头从宫管结合部子宫角端插入输卵管5-8mm，再实施冲卵。
采集早期胚胎细胞器械方法

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