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[发明专利]一种牙髓干细胞的制备方法-CN202010011360.7在审
发明人：罗世杰 -专利权人：深圳华云生物科技发展有限公司
申请日： 2020-01-06 - 公布日： 2020-04-03 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明属于细胞培养技术领域，特别是涉及一种牙髓干细胞的制备方法，该方法包括：从牙齿中取出牙髓组织并剪碎牙髓组织；将剪碎后的牙髓组织置于牙髓干细胞培养基中，离心，然后去掉上清液，得到牙髓组织液；向牙髓组织液中添加Ⅰ型胶原酶，并在特定温度下消化；向消化后的牙髓组织液中继续添加牙髓干细胞培养基，并提纯得到牙髓干细胞单细胞悬液；基于牙髓干细胞单细胞悬液制备得到牙髓干细胞。本发明使用了酶消化法制备牙髓干细胞，酶消化法比组织贴壁法培养细胞具有更高效率的优点，细胞可以在短时间内贴壁，使后续干细胞培养更为简单快捷；本发明制备的细胞免疫原性低，适用人群范围广，且后续扩增方便，细胞活性高符合临床应用要求
一种牙髓干细胞制备方法

[发明专利]一种牙髓干细胞原代提取方法-CN201910520388.0有效
发明人：张喻 -专利权人：华夏源细胞工程集团股份有限公司
申请日： 2019-06-17 - 公布日： 2022-10-14 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种牙髓干细胞原代提取方法，属于牙髓干细胞提取领域，一种牙髓干细胞原代提取方法，包括提取步骤以及步骤中必要的特殊实验仪器，按照提取步骤，工作人员能够将牙齿中的牙髓干细胞进行纯化培育，同时在对牙髓组织取出的步骤中，利用特殊实验仪器对牙齿进行钻孔的过程中，能够对深层的牙髓组织进行采集，大大增加了采集到的牙髓干细胞的活性，从而增加了采集到的牙髓组织的质量，同时将牙齿钻孔步骤与牙髓组织采集步骤合并，能够减小外界环境中活性较强的细胞混入牙髓组织中，增加了后续对牙髓干细胞纯化培育的可能。
一种牙髓干细胞提取方法

[发明专利]一种用于牙髓干细胞分离的试剂盒及其应用-CN202111396372.7在审
发明人：曾皓宇;沈振波;刘园月;林燕纯;叶凌;辛嫚;刘素娜;郭艳正 -专利权人：广东普罗凯融生物医药科技有限公司
申请日： 2021-11-23 - 公布日： 2022-02-11 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供一种用于牙髓干细胞分离的试剂盒及其应用。该试剂盒至少包括牙髓组织保护液和牙髓组织清洗液；牙髓组织保护液含有PSN抗生素组合物、血小板裂解液、L‑谷氨酰胺、D‑葡萄糖、丙酮酸钠、碳酸氢钠和HEPES，且牙髓组织保护液的pH值为7.2±0.2；牙髓组织清洗液为含有将该试剂盒用于牙髓干细胞的分离制备中，同时通过对牙齿消毒清洗方法的调整，使用胶原酶和中性蛋白酶对牙髓组织进行消化，能够有效降低牙髓干细胞分离制备过程中被污染的风险，有利于促进牙髓干细胞的爬出，提高牙髓干细胞的纯度和获得率，有利于后续牙髓干细胞培养过程中的增殖，为工业上高效分离制备牙髓干细胞提供了理论指导。
一种用于牙髓干细胞分离试剂盒及其应用

[发明专利]一种牙髓组织间充质干细胞的消化分离方法-CN202010925856.5在审
发明人：牟浩;刘立剑;张珺 -专利权人：中康再生医学科技（海南）有限公司
申请日： 2020-09-04 - 公布日： 2020-12-04 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供了一种牙髓组织间充质干细胞的消化分离方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)获取牙髓组织；步骤2)分离培养牙髓组织间充质干细胞；步骤2.1)用眼科剪将步骤1获得的牙髓组织剪成0.5mm×0.5mm×0.5mm小块，加入1～3mg/ml的I型胶原酶、2～5mg/ml的中性蛋白酶和0.5～2mg/ml的胰酶，37℃中消化8～12min使牙髓组织松散。本发明的牙髓组织间充质干细胞增殖稳定性好，增殖数量大。
一种牙髓组织间充质干细胞消化分离方法

[发明专利]一种牙髓牙本质复合体的制备方法及其应用-CN202111219994.2有效
发明人：高波;李雯旭;叶玲;余思静;刘柯玥;王婧宜 -专利权人：四川大学
申请日： 2021-10-20 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： A61L27/38 文献下载
摘要：本发明涉及一种牙髓牙本质复合体的制备方法及其应用。所述牙髓牙本质复合体的制备方法包括牙髓细胞的原代、传代培养；液相浓缩生长因子的制备；将所述培养后的牙髓细胞与液相浓缩生长因子混合，得到混合材料。从而制得牙髓牙本质复合体结构，有效促进牙髓组织的再生。本发明通过利用自体牙髓细胞和液相浓缩生长因子混合作为年轻恒牙牙髓组织工程支架，可促进牙根继续生长，减轻患者疼痛；取材无免疫型，牙髓干细胞移植可产生异位的牙髓样组织，可控制移植细胞的数量并筛选对牙髓牙本质复合体再生潜在效果最佳的细胞亚群，促进牙髓再生，恢复牙髓活力；液相生长因子能加速伤口愈合进程，并通过刺激细胞增殖分化和促进干细胞迁移从而利于组织再生。
一种牙髓牙本质复合体制备方法及其应用

[发明专利]一种使用牙髓干细胞制剂修复子宫内膜损伤的方法-CN202110440102.5在审
发明人：毛艳红;王馨雨;马玲;王逸瀚;王伦云;叶青松 -专利权人：优牙生物科技（上海）有限公司
申请日： 2021-04-23 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种使用牙髓干细胞制剂修复子宫内膜损伤的方法，包括以下步骤：步骤一、牙髓干细胞的制备；使用酶消化法进行细胞原代培养，在超净工作台中，从预冷的培养基中取出牙齿，用含2％青霉素/链霉素的PBS反复冲洗三次，加入含10％FBS的完全培养基，从牙齿中取出牙髓组织并剪碎牙髓组织，将剪碎后的牙髓组织置于牙髓干细胞培养基中，离心800rpm5min，然后去掉上清液，得到牙髓组织液，向牙髓组织液中添加Ⅰ型胶原酶；本发明将PF127溶液与牙髓干细胞结合，在低温状态下，此复合物为液体状，方便注射，而在室温下，此复合物成胶状，可在子宫腔局部持续发挥作用，副反应小，有效浓度高。
一种使用牙髓干细胞制剂修复子宫内膜损伤方法

[发明专利]一种牙髓干细胞的获取和储存方法-CN202210850565.3在审
发明人：张雪梅;王小龙;陈艳普;王梦军;程志远 -专利权人：河南省银丰生物工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
申请日： 2022-07-20 - 公布日： 2022-09-30 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种牙髓干细胞的获取和储存方法，具体涉及牙髓干细胞提取储存技术领域，步骤一、取出拔出未满三天储存的牙齿，然后通过医用酒精对牙齿进行消毒处理，消毒后取出牙齿并通过无尘布擦拭牙齿表面残余的酒精，然后将准备的牙齿置入含有双抗的生理盐水中浸泡30min；步骤二、取出牙齿擦拭干净后，将牙齿置放在洁净的操作台上，用剪切设备将牙齿剪切取出牙髓组织，并将牙髓组织剪切成若干个块状结构；步骤三、将牙髓组织置于离心管中，利用离心机对牙髓组织进行离心处理，离心结束后去掉上清液，得到牙髓组织液。本发明对牙髓干细胞的提取方式设计较为简单，且获取后的牙髓干细胞数量多，且易于培养和后续储存。
一种牙髓干细胞获取储存方法

[发明专利]牙髓间充质干细胞的分离培养方法-CN202011547490.9有效
发明人：陈瑜;潘华峰 -专利权人：重庆市博康生物工程技术有限公司
申请日： 2020-12-23 - 公布日： 2022-11-29 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供了一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，所述方法包括：步骤S1，取出牙样本并夹裂，然后取出牙样本中的牙髓组织、切碎，并将切碎的牙髓组织浸没于培养基中，备用；步骤S2，取灭菌后的玻璃微珠于容器中，并用完全培养基浸泡，备用；步骤S3，将步骤S1中备用的牙髓组织浅埋于步骤S2中备用的玻璃微珠中，培养1～3小时，得到玻璃微珠‑牙髓组织复合体；步骤S4，将步骤S3中制备得到的玻璃微珠‑牙髓组织复合体进行传代培养，并用胰蛋白酶收集，得目的牙髓间充质干细胞。本发明通过提出一种牙髓间充质干细胞的分离培养方法，以解决相关技术中无法进行牙髓间充质干细胞的规模化生产的技术问题。
牙髓间充质干细胞分离培养方法

[发明专利]一种促内源性牙髓再生注剂、制法及BMP7在制备牙髓再生注剂中的应用-CN202210733680.2在审
发明人：田卫东;梁成;廖立;汤颖峰;张静怡 -专利权人：成都世联康健生物科技有限公司
申请日： 2022-06-24 - 公布日： 2022-10-04 - 主分类号： A61L27/26 文献下载
摘要：本发明提供一种促内源性牙髓再生注剂、制法及BMP7在制备牙髓再生注剂中的应用，通过胶原凝胶搭载BMP7细胞因子，诱导根尖部的静止干细胞向根管内部迁移，再生缺失的牙髓组织。其中，BMP7细胞因子通过诱导内源性干细胞归巢和牙向分化触发牙髓组织再生，并且作为促血管生成因子介导再生牙髓组织中的血管形成，而胶原凝胶提供了良好的再生微环境，支持干细胞的粘附，伸展，自我更新。此外，本发明提供的含BMP7注剂用于因牙髓部分或全部坏死导致的牙髓丧失临床问题，能够有效简化基于细胞移植策略的牙髓再生治疗步骤，促进内源性的牙髓组织再生，减少病患痛苦。
一种内源牙髓再生制法 bmp7 制备中的应用

[发明专利]一种牙髓间充质干细胞的制备方法-CN201911393603.1在审
发明人：钟军;朱建斌 -专利权人：上海循益生物技术有限公司
申请日： 2019-12-30 - 公布日： 2020-06-26 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种牙髓间充质干细胞的制备方法，包括如下步骤：S1收集乳牙组织的步骤；S2将收集到的乳牙组织在低温条件下运送至实验室的步骤；S3利用液压钳对乳牙组织进行挤压破碎的步骤；S4将牙髓与破碎的乳牙组织进行分离的步骤；S5将分离出的牙髓放入实验室小型捣碎机中进行捣碎处理的步骤；S6对牙髓干细胞进行扩增培养的步骤。本发明所提供的牙髓间充质干细胞的制备方法，采用液压钳破碎处理乳牙组织并对乳牙组织进行挤压破碎处理和对牙髓进行捣碎处理，操作便捷、效率高、节省原料、干细胞提取成功率高。
一种牙髓间充质干细胞制备方法

[发明专利]一种牙髓干细胞分离及培养方法-CN201910155437.5在审
发明人：于奎;王化云;马永江;谢水林;于萍 -专利权人：广州南医大生物工程有限公司
申请日： 2019-03-01 - 公布日： 2019-06-18 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开了一种牙髓干细胞分离及培养方法，包括以下步骤：牙髓组织的分离、用质量体积浓度均为0.05‑0.5％的Ⅳ型胶原酶、Ⅴ型胶原酶和胰酶的混合酶对牙髓组织进行酶解、牙髓干细胞原代培养、在培养基中添加细胞生长因子本发明具有以下优点：牙髓组织消化更彻底，获得的牙髓干细胞总数更多；增加了牙髓干细胞获得总数，提高了牙髓干细胞的细胞活率，同时缩短其传代时间，大大缩短了牙髓干细胞分离培养的周期。
牙髓干细胞牙髓组织胶原酶铁皮石斛提取物细胞生长因子传代复合维生素分离培养谷氨酰胺银耳多糖原代培养培养基川党参混合酶提取物胰岛素酶解胰酶细胞消化

[发明专利]一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法及应用-CN202211436970.7在审
发明人：高振华;石媛媛;刘长营;王莹鑫;单兆臣 -专利权人：首都医科大学附属北京口腔医院
申请日： 2022-11-16 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： A61L27/36 文献下载
摘要：本发明涉及干细胞培养技术领域，提出了一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法及应用。所述一种脱细胞基质构建组织工程血管化牙髓的方法，包括以下步骤：S1、大鼠颌下腺脱细胞处理得到脱细胞颌下腺基质；S2、将所述脱细胞颌下腺基质冻干得到冻干支架；S3、将所述冻干支架体外接种牙髓干细胞得到牙髓干细胞‑支架复合体；S4、将所述牙髓干细胞‑支架复合体与牙根切片构建组织工程复合体。通过上述技术方案，解决了相关技术中的牙髓组织获取来源少、组织获取及操作复杂问题。
一种细胞基质构建组织工程血管牙髓方法应用

[发明专利]用于从牙髓组织衍生的细胞制备牙髓干细胞的方法-CN201880022118.0在审
发明人：山座孝义;园田聪一朗;浜园俊郎 -专利权人：国立大学法人九州大学;株式会社再生科技工程
申请日： 2018-02-01 - 公布日： 2019-11-19 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：[问题]本发明解决了提供一种用于从牙髓组织收集的牙髓细胞有效制备牙髓干细胞的方法的问题。[解决方案]根据本发明的用于从收集自牙髓组织的牙髓细胞制备牙髓干细胞的方法包括：(a)使用包含7％至13％(V/V)血清的培养液预培养牙髓细胞的步骤，牙髓细胞附着至培养皿；(b)用包含7％至13％(V/V)血清的培养液培养通过步骤(a)附着至培养皿的牙髓细胞至少一天的步骤；和(c)在步骤(b)之后在低血清条件下培养牙髓细胞的步骤。
牙髓细胞培养皿牙髓干细胞牙髓组织血清附着制备培养液培养液培养低血清预培养

[发明专利]一种牙髓间充质干细胞的培养方法-CN202111038934.0在审
发明人：赵辉;高萧芳;孙宪凯;崔兰云;段书娇 -专利权人：郑州源创吉因实业有限公司
申请日： 2021-09-06 - 公布日： 2021-11-05 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开一种牙髓间充质干细胞的培养方法，步骤包括把掉落下的牙齿清洗后放在无菌取样瓶中，然后把无菌取样瓶放进医用冰袋中储存；使用生理盐水冲洗牙髓腔，使牙髓质被水流带出牙髓腔、进入生理盐水中；把带有牙髓质的生理盐水经过过滤得到固体的牙髓质，把粉碎后的牙髓质浸入生理盐水中，得到牙髓组织液；向牙髓组织液中加入胶原酶，消化30分钟，然后把终止消化的牙髓间干细胞培养基重悬，接种至培养瓶中扩增培养。本发明在取样时钻透牙本质然后冲洗取样能够避免在取样时污染牙釉质，并且冲洗能够避免取样时取到牙本质细胞层、乏细胞层和多细胞层的杂质，通过粉碎牙釉质再浸入生理盐水得到的牙髓组织液能够减少牙髓中的纤维、神经等杂质成分
一种牙髓间充质干细胞培养方法

[实用新型]一种提取牙髓组织的工具-CN202020444559.4有效
发明人：陈碧清;陈庆林 -专利权人：北京泓信干细胞生物技术有限公司
申请日： 2020-03-31 - 公布日： 2021-06-11 - 主分类号： C12M1/26 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种提取牙髓组织的工具，包括针头部、连接部、以及握杆部，所述针头部由针尖部和针杆部组成，从针尖部的尖端至底端沿其轴线开设有槽一，从针杆部的一端至另一端沿其轴线开设有槽二，所述连接部上端固定在针杆部的下端，下端固定在握杆部的上端，通过针尖部的下端面、针杆部的内壁、以及连接部的上端面围成牙髓存储腔，槽一与槽二构成该牙髓存储腔的牙髓组织进口，在牙髓存储腔内转动连接有遮盖，遮盖通过设置在握杆部内部的驱动组件驱动转动，对牙髓组织进口实现打开或关闭，本实用新型在取样器拔出时，能够封闭牙髓存储腔，保证内部牙髓组织液不受污染，进而提高干细胞的活性。
一种提取牙髓组织工具

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