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[发明专利]一种一步式蛋白体外泛素化反应盒-CN202310008055.6在审
发明人：董磊;夏琴;李杨 -专利权人：北京理工大学
申请日： 2023-01-04 - 公布日： 2023-08-22 - 主分类号： C07K1/107 文献下载
摘要：本发明提供一种一步式蛋白体外泛素化反应盒，应用于人源蛋白体外泛素化修饰验证的一步式蛋白体外泛素化反应盒。本发明包括泛素化E1酶PET‑21a‑Ube1，E2酶PGEX‑5X‑1‑UbcH5c和泛素分子PET‑21a‑HA‑Ubiquitin混合蛋白，泛素化E3，缓冲液A，缓冲液B，底物蛋白，反应管和可移动加热制冷板在本发明所包含的缓冲液、时间、温度和蛋白浓度配比下，可以验证泛素化E3酶的体外泛素化能力。该反应盒可以方便、准确、高效地鉴定泛素E3连接酶是否具有泛素化底物蛋白的能力，能被广范围应用于泛素化验证实验。
一种一步蛋白体外泛素化反应

[发明专利]一种用于预测泛素化酶与底物关联的方法及模型-CN202310787704.7在审
发明人：王佳;潘贵青;黄裕安;林秋镇;李坚强 -专利权人：深圳大学
申请日： 2023-06-29 - 公布日： 2023-10-24 - 主分类号： G16B20/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于预测泛素化酶与底物关联的方法及模型，所述方法通过获取泛素化酶蛋白质数据和底物蛋白质数据；根据泛素化酶蛋白质数据和底物蛋白质数据分别确定泛素化酶特征向量和底物特征向量；获取泛素化酶和底物对应的初始映射关系，根据初始映射关系、泛素化酶特征向量以及底物特征向量确定泛素化酶和底物对应的目标映射关系。由于本发明通过获取泛素化酶蛋白质数据和底物蛋白质数据，并根据泛素化酶蛋白质数据和底物蛋白质数据预测泛素化酶和底物之间的目标映射关系，涉及的生物数据类型以及生物学知识较少，因此可以有效地解决现有技术对于领域知识的依赖较强
一种用于预测泛素化酶关联方法模型

[发明专利]一种基于荧光偏振的去泛素化酶活性检测方法-CN202110903587.7在审
发明人：易华伟;张嫦丽;王清清;范文;罗伟;辛陈琦 -专利权人：荆州市第一人民医院（荆州市肿瘤医院、长江大学附属第一医院）
申请日： 2021-08-05 - 公布日： 2021-10-19 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明提供了一种基于荧光偏振的去泛素化酶活性检测方法。所述方法包括如下步骤：1、去泛素化酶检测探针的制备，包括制备融合蛋白Ub‑linker‑Cys、连接BODIPY探针、质谱检测；2、检测去泛素化酶的活性，包括选择去泛素化酶、去泛素化对探针FP值的影响、实时检测去泛素化酶的活性。该检测方法是基于检测荧光偏振，荧光偏振检测的是平行方向和垂直方向荧光强度的比例关系，其不易受荧光探针的浓度、溶液温度和pH以及其他荧光信号的干扰，在测量去泛素化酶的活性时，步骤简单、耗时短，且探针和去泛素化酶的用量少此外，该方法中制备的探针也可用于去泛素化酶抑制剂的筛选，且是高通量的。
一种基于荧光偏振去泛素化酶活性检测方法

[发明专利]人工构建的杂种泛素结合结构域多肽及其应用-CN201410323921.1有效
发明人：徐平;高媛;李衍常;赵明治;王京伟;常蕾;武军驻;贺福初 -专利权人：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所
申请日： 2014-07-08 - 公布日： 2018-04-27 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种人工构建的杂种泛素结合结构域多肽及其应用。本发明所提供的杂种泛素结合结构域多肽，由至少两个泛素结合结构域串联而成；且在组成所述杂种泛素结合结构域多肽的所有泛素结合结构域中，至少有两个泛素结合结构域是不同的。另外，所述杂种泛素结合结构域多肽还可含有标签蛋白。实验证明，本发明提供的杂种泛素结合结构域多肽能够高效、无偏性的结合泛素分子及其携带的不同的泛素链，可以提高大规模泛素化蛋白质的富集效率，用于开发高效的泛素化蛋白质分离介质和生化试剂，也可为体内蛋白质泛素化的调节提供技术手段本发明对于推动人类疾病样本泛素化蛋白质组学研究和健康医学的发展具有重要意义。
人工构建杂种结合结构多肽及其应用

[发明专利]一种蛋白体外泛素化修饰快速检测试剂盒-CN201710015023.3在审
发明人：蔡启良;干劲;朱彩霞 -专利权人：复旦大学
申请日： 2017-01-09 - 公布日： 2018-07-17 - 主分类号： C12Q1/37 文献下载
摘要：本发明属生物化学与分子生物学领域，具体涉及一种蛋白体外泛素化修饰快速检测试剂盒，尤其是克隆和原核表达泛素化修饰系统的E1，E2与泛素分子，以及应用于人源蛋白体外泛素化修饰验证。本发明中使用大肠杆菌原核表达并纯化泛素化E1酶Uba1，E2酶Ubc5a和泛素分子GST‑ubiquitin，在合适的反应缓冲液、时间、温度和蛋白浓度配比下，可以对特定的泛素E3连接酶或是蛋白底物进行体外泛素化修饰该试剂盒可以方便、准确地鉴定底物蛋白是否具有泛素化修饰，能被广范围应用于泛素化验证实验。
泛素修饰快速检测试剂盒原核表达体外种蛋分子生物学领域大肠杆菌验证反应缓冲液蛋白底物底物蛋白浓度配比人源蛋白生物化学修饰系统试剂盒应用蛋白克隆

[发明专利]一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法-CN202211119498.4有效
发明人：冯宇驰;李维捷;徐朋奇;张影;何俊 -专利权人：深圳粒影生物科技有限公司
申请日： 2022-09-14 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开一种利用化学交联制备纯化泛素化或类泛素化组蛋白八聚体的方法，包括以下步骤：(1)表达纯化得到突变型泛素或类泛素蛋白；所述突变型泛素的C末端为半胱氨酸，所述突变型类泛素蛋白的C末端甘氨酸对应的核苷酸序列突变为半胱氨酸对应的核苷酸序列；(2)表达纯化得到突变型的组蛋白八聚体；所述突变型的组蛋白八聚体在进行泛素化/类泛素化修饰位点上的赖氨酸突变为半胱氨酸；(3)利用化学交联剂，将突变型泛素或类泛素蛋白与突变型组蛋白八聚体在非变性条件下进行交联反应该方法利用化学交联方法直接在组蛋白八聚体水平上进行体外构建泛素化/类泛素化组蛋白八聚体。
一种利用化学交联制备纯化泛素化类泛素化组蛋白八聚体方法

[发明专利]渗透胁迫泛素化修饰蛋白筛选方法-CN201811538526.X有效
发明人：唐勋;司怀军;张宁 -专利权人：甘肃农业大学
申请日： 2018-12-17 - 公布日： 2021-05-18 - 主分类号： G01N30/08 文献下载
摘要：本发明提供一种马铃薯渗透胁迫下泛素化修饰蛋白筛选方法，包括：（1）茎尖脱毒组培苗繁育及分组与胁迫处理；（2）泛素（Ub）和26S蛋白酶体（26S）表达量测定并确定取样时间；（3）蛋白质样品制备；（4）蛋白样品胰酶酶解；（5）泛素化肽段富集；（6）LC‑MS/MS分析；（7）质谱数据分析。该方法能够准确并最大限度的筛选出马铃薯渗透胁迫下泛素化修饰蛋白，共得渗透胁迫下差异泛素化修饰位点25个，这些显著变化的泛素化修饰蛋白与渗透胁迫响应有关，因此本申请所述筛选泛素化修饰蛋白的方法对发现响应渗透胁迫的基因和阐明泛素化修饰参与渗透胁迫的机制具有重要意义和显著进步
渗透胁迫泛素化修饰蛋白筛选方法

[发明专利]非抗体依赖的泛素化修饰富集方法和检测方法-CN202210220908.8在审
发明人：张小飞;孙明伟;张青;邬文峰;黄秋玲 -专利权人：中国科学院广州生物医药与健康研究院;生物岛实验室
申请日： 2022-03-08 - 公布日： 2022-06-10 - 主分类号： G01N30/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种非抗体依赖的蛋白质泛素化修饰富集方法，包括全蛋白质提取、蛋白水平自由氨基完全封闭、底物蛋白上泛素链水解、含有可富集标签试剂标记泛素化修饰位点处的自由氨基、蛋白质的酶切、标记的泛素化修饰肽段的富集本发明还涉及检测方法，即对富集后的泛素化修饰肽段通过液相‑质谱检测。本发明不需要利用抗体识别酶切后产生的泛素残留基序，即可实现蛋白质泛素化修饰的无差别富集及鉴定。
抗体依赖泛素化修饰富集方法检测

[发明专利]泛素结合结构域融合蛋白在泛素化蛋白质的检测和分离中的应用-CN201210533058.3无效
发明人：林琼 -专利权人：江苏大学
申请日： 2012-12-12 - 公布日： 2013-04-24 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种利用泛素结合结构域（Ubiquitin-bindingdomain，UBD）融合蛋白分离和检测泛素化蛋白的方法。其原理是用一个亲和标签与一个泛素结合结构域构建一个融合蛋白。带有泛素结合结构域融合蛋白的凝胶颗粒与细胞或组织的裂解液共育，可将裂解液中的泛素化蛋白通过沉淀分离出来。本发明在检测泛素化蛋白上比目前的抗体免疫沉淀检测法具有更高的效率，检测容量和灵敏度。此外，从经济效益角度相比，本发明检测泛素化蛋白的费用远低于昂贵的抗体免疫沉淀法；可应用于蛋白泛素化的基础研究及医疗诊断化验中的泛素化蛋白的测定。
结合结构融合蛋白泛素化蛋白质检测分离中的应用

[发明专利]一种蛋白质类泛素化修饰的检测方法及其应用-CN201310752040.7在审
发明人：张春阳;杨用 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测方法，该方法将表达待测蛋白质的重组质粒以及表达带四半胱氨酸多肽标签的类泛素化修饰蛋白的重组质粒共转染宿主细胞进行蛋白质的类泛素化修饰，然后进行蛋白质纯化、双砷染料标记、并对待测蛋白质的类泛素化修饰进行检测和待测蛋白质的多聚类泛素化修饰的修饰程度进行量化分析；该方法灵敏度高，简单易行。此外，本发明还提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测质粒及其制备方法；另外，本发明还提供了一种蛋白质类泛素化修饰的检测试剂盒。
一种蛋白质类泛素化修饰检测方法及其应用

[发明专利]一种泛素链固相检测方法和应用-CN201910491358.1有效
发明人：李衍常;徐平;肖伟弟;高媛;常蕾;高慧英 -专利权人：北京蛋白质组研究中心
申请日： 2019-06-06 - 公布日： 2022-08-23 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及生物样本中蛋白质泛素化修饰的高效、灵敏且无偏性的检测方法。以由两个不同的泛素结合结构域串联而成且N端含有标签蛋白(GST)的人工合成多肽(ThUBD)作为检测试剂。与通用的商业化泛素抗体相比，本发明提供的检测试剂以及固相检测方法能够高效、无偏性的识别泛素分子形成的8种不同泛素链，实现对生物样本内源泛素链的无偏性检测；可以显著提高泛素化蛋白质的检测灵敏度。
一种泛素链固相检测方法应用

[发明专利]泛素突变体及其制备方法和用途-CN202111572300.3在审
发明人：段小涛;杜现礼;王勃;庞静 -专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2021-12-21 - 公布日： 2022-03-18 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明提供含有非天然氨基酸的泛素突变体，其中至少一个参与泛素化连接的氨基酸经修饰或突变从而不参与泛素化连接。还提供用于制备所述泛素突变体的方法、分离的核酸分子、表达载体和宿主细胞，以及所述泛素突变体的用途。
突变体及其制备方法用途

[发明专利]一种检测样品中多聚泛素化信号的检测方法-CN202111644251.X在审
发明人：李衍常;徐平;黄帅;高媛;肖伟弟;常蕾 -专利权人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
申请日： 2021-12-29 - 公布日： 2022-08-19 - 主分类号： G01N33/68 文献下载
摘要：本发明涉及生物样本中蛋白质泛素化修饰的高效、灵敏且特异的检测方法。本发明方法的泛素化修饰检测试剂，是由两个不同的泛素结合结构域串联而成的人工合成多肽(ThUBD)，且N端含有标签蛋白GST，通过GST标签与辣根过氧化物酶(HRP)或荧光素(Fluorescein)连接该检测试剂与方法可以真实有效地检测甲醛固定石蜡包埋的组织样本(FFPE)中的泛素化信号，并实现对生物样本内源多聚泛素链信号的荧光成像分析。与商业化抗体法以及公布的泛素化信号检测方法，该发明方法具有高效、简洁、灵敏、特异的检测性能，可为细胞和组织内的泛素化蛋白调节的检测提供技术手段。
一种检测样品中多聚泛素化信号方法

[发明专利]RNF31在调控YAP的泛素化水平中的应用-CN202111000023.9有效
发明人：李秀敏;侯婧晗;王伟隆;陈贞;周孝峰;高灿;闫子怡;吕本洁;徐凌钰;王晓;胡斯佳;关瑞瑞;赵梓均;宋美丽;申芳芳;刘凤艳 -专利权人：新乡医学院第三附属医院
申请日： 2021-08-27 - 公布日： 2022-06-21 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，尤其涉及RNF31在调控YAP的泛素化水平中的应用。本发明通过在HEK293T细胞系转染RNF31质粒从而引起RNF31蛋白表达增高，同时转染YAP与泛素质粒，通过免疫共沉淀方式进行泛素化实验，利用western blot检测RNF31的蛋白表达水平和YAP蛋白的泛素化水平。本发明首次发现了RNF31蛋白表达与YAP蛋白的泛素化水平相关，通过检测受试细胞系中RNF31的表达，可以判断受试细胞YAP蛋白的泛素化水平的强弱。同时，通过在受试细胞中转染RNF31质粒，可以调控RNF31蛋白的表达量，从而调控YAP蛋白的泛素化水平。
rnf31 调控 yap 泛素化水平中的应用

[发明专利]一种癌干细胞样耐药细胞来源泛素化蛋白及其在制备抗癌药物中的应用-CN201910967207.9有效
发明人：王立新;黄芳 -专利权人：东南大学
申请日： 2019-10-12 - 公布日： 2021-07-09 - 主分类号： C07K14/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种癌干细胞样耐药细胞来源泛素化蛋白及其在制备抗癌药物中的应用，其主要由以下方法制备所得：(1)利用化疗药诱导癌细胞耐药，得到富集了癌干细胞的癌干细胞样耐药细胞株；(2)将泛素化蛋白募集蛋白偶联至佐剂，得偶联佐剂；(3)培养上述癌干细胞样耐药细胞株，抑制其泛素化蛋白降解，然后利用步骤(2)所得的偶联佐剂募集泛素化蛋白，即得所述泛素化蛋白。本发明在原有基础上改变了泛素化蛋白来源，制备获得了具有癌干细胞样耐药肿瘤细胞抗原特异性的泛素化蛋白，诱导了具有癌干细胞样耐药肿瘤细胞特异性的免疫应答，并且联合STING激动剂，大大提高疫苗的治疗肿瘤的效果
一种干细胞耐药细胞来源泛素化蛋白及其制备抗癌药物中的应用

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