本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒检测试剂盒及其应用。本发明提供的试剂盒,包括三对引物,即与猪繁殖与呼吸综合征病毒Gen Bank Accession NumberU87392中MN基因结合的内侧引物对、外侧引物对和环形引物对。试剂盒还包括环介导等温扩增试剂、阳性对照、阴性对照、和荧光显色剂,阳性对照为猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA。本发明还提供了一种应用本发明的试剂盒检测死亡动物中是否携带猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法。本发明的试剂盒,检测灵敏度高,6-10个拷贝即可检测出目的RNA,操作简单方便,特别适于基层现场进行的临床医学检测及食品中可能污染的猪繁殖与呼吸综合征病毒的检测。