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[发明专利]蜘蛛梨状腺丝蛋白基因序列的应用及其改良家蚕丝性能的方法-CN202010392628.6有效
发明人：钟伯雄;唐晓利 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-05-11 - 公布日： 2023-01-06 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种蜘蛛梨状腺丝蛋白基因序列的应用及其改良家蚕丝性能的方法。蜘蛛梨状腺丝蛋白基因的碱基为由花园银蛛梨状腺丝重复片段单元、络新妇蛛梨状腺丝重复片段单元构成的重复序列，具有改良家蚕丝性能等应用；构建家蚕合成分泌蜘蛛梨状腺丝蛋白基因的载体，再利用显微注射将带有蜘蛛梨状腺丝蛋白基因的质粒与辅助质粒导入到家蚕受精卵内，利用转座子使荧光蛋白基因和蜘蛛梨状腺丝蛋白基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，育成分泌蜘蛛梨状腺丝蛋白的转基因家蚕。本发明发现了一种蜘蛛梨状腺丝蛋白基因的用途，并开发了一种新型家蚕蜘蛛仿生丝的改良家蚕丝性能的生产方法，显著提高了蚕丝的机械性能。
蜘蛛梨状腺丝蛋白基因序列应用及其良家蚕丝性能方法

[发明专利]蜘蛛葡萄状腺丝蛋白基因序列的应用及其改良家蚕丝性能的方法-CN202010392618.2有效
发明人：钟伯雄;王晓晓 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-05-11 - 公布日： 2022-12-06 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种蜘蛛葡萄状腺丝蛋白基因序列的应用及其改良家蚕丝性能的方法。蜘蛛葡萄状腺丝蛋白基因为黑寡妇蜘蛛葡萄状腺丝或者园蛛葡萄状腺丝1倍碱基重复单元以1‑8倍连续重复构成的基因序列，具有改良家蚕丝性能等应用；先构建家蚕合成分泌葡萄状腺丝蛋白的载体pBac‑ACSP质粒，将质粒与辅助质粒导入到家蚕受精卵内，用转座子使荧光蛋白基因和葡萄状腺丝蛋白基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，育成分泌蜘蛛葡萄状腺丝蛋白的转基因家蚕。本发明发现了一种蜘蛛葡萄状腺丝蛋白基因的用途，并开发了一种新型家蚕蜘蛛仿生丝的改良家蚕丝性能的生产方法，降低生产成本，显著提高了蚕丝的机械性能。
蜘蛛葡萄状腺丝蛋白基因序列应用及其良家蚕丝性能方法

[发明专利]蜘蛛聚状腺丝蛋白基因序列的应用及其改良家蚕丝性能的方法-CN202010392626.7有效
发明人：钟伯雄;唐晓利 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-05-11 - 公布日： 2023-01-06 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种蜘蛛聚状腺丝蛋白基因序列的应用及其改良家蚕丝性能的方法。蜘蛛聚状腺丝蛋白基因为由络新妇蛛聚状腺丝1倍碱基重复单元以1‑8倍连续重复构成的基因序列，具有改良家蚕丝性能等应用；先构建家蚕合成分泌聚状腺丝蛋白的载体pBac‑ASG质粒，再利用显微注射将质粒与辅助质粒导入到家蚕受精卵内，用转座子使荧光蛋白基因和聚状腺丝蛋白基因导入到家蚕基因组内，并稳定遗传和表达，育成分泌蜘蛛聚状腺丝蛋白的转基因家蚕；本发明发现了一种蜘蛛聚状腺丝蛋白基因的用途，并开发了一种新型家蚕蜘蛛仿生丝的改良家蚕丝性能的生产方法，降低生产成本，显著提高了蚕丝的机械性能。
蜘蛛聚状腺丝蛋白基因序列应用及其良家蚕丝性能方法

[发明专利]一种提高蚕丝产量的转基因方法-CN201010118072.8有效
发明人：李胜;马俐;夏庆友;徐汉福 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院;西南大学
申请日： 2010-03-05 - 公布日： 2011-09-21 - 主分类号： A01K67/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种提高蚕丝产量的转基因方法，可通过在家蚕后丝腺中特异性表达促细胞生长基因，获得后丝腺增大的家蚕，所述的家蚕高产蚕丝。本发明提供了促后丝腺生长的基因，还提供了适合的在家蚕后丝腺中特异性高表达促后丝腺生长的基因的表达系统。本发明为家蚕品种的产丝性状改良提供新的手段和方法。
一种提高蚕丝产量转基因方法

[发明专利]一种在家蚕丝腺中表达重组I型类人胶原蛋白的方法-CN201610289773.5在审
发明人：徐豫松;王华兵;占鹏飞 -专利权人：浙江大学
申请日： 2016-05-03 - 公布日： 2016-09-28 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开一种在家蚕丝腺中表达重组I型类人胶原蛋白的方法，利用家蚕后部丝腺生产具有广泛用途和经济价值的Ⅰ型类人胶原蛋白。该方法获得的重组I型类人胶原蛋白能够在家蚕丝腺中稳定表达，并在后代延续。
一种在家蚕丝表达重组型类人胶原蛋白方法

[发明专利]一种sgRNA及转基因表达载体、表达品系、筛选方法-CN201910755532.9有效
发明人：刘仕平;王伟 -专利权人：西南大学
申请日： 2019-08-15 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12N15/113 文献下载
摘要：本发明属于家蚕基因工程和人工育种技术领域，公开了一种sgRNA及转基因表达载体、表达品系、筛选方法。利用CRISPR/Cas9系统，首先建立一个表达let‑7Complex/Cluster(let‑7C)敲除所用sgRNA的品系，将该品系与特定Cas9表达品系进行杂交，实现let‑7C在家蚕丝腺中的敲除；将sgRNA表达品系与中部丝腺、后部丝腺Cas9表达品系分别进行杂交，获得let‑7C在中部丝腺特异敲除的品系和let‑7C后部丝腺特异敲除品系。本发明通过CRISPR/Cas9对家蚕丝腺let‑7进行敲除，能促进丝腺的发育，增加丝蛋白的表达并提高家蚕的蚕丝产量。
一种 sgrna 转基因表达载体品系筛选方法

[发明专利]利用家蚕丝心蛋白重链启动子大量表达外源蛋白的方法-CN200610054442.X无效
发明人：赵爱春;夏庆友;鲁成;向仲怀 -专利权人：西南大学
申请日： 2006-07-14 - 公布日： 2007-02-14 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：一种利用家蚕丝心蛋白重链启动子大量表达外源蛋白的方法，突破转基因蚕中被表达的外源蛋白在丝心蛋白中的含量低的难点，首次开发和利用家蚕丝心蛋白重链启动子，通过转基因家蚕大量表达外源表达蛋白，含量远远高于利用轻链蛋白和fhx启动子在转基因家蚕丝腺里产生外源蛋白的含量，达到16％左右。解决这一瓶颈，创造真正实用的家蚕丝腺生物反应器，可拓宽家蚕的应用领域，保持蚕丝产业可持续发展。利用该方法，通过大量饲养目的转基因家蚕，可以简单地收获转基因家蚕蚕茧而大量获得目的外源蛋白。
利用家蚕蛋白启动子大量表达方法

[发明专利]后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法-CN201610348866.0在审
发明人：徐世清;王玉军;陈学冬;王永锋;李秋颖;陶卉;邢瑞;司马杨虎;陈息林;殷为民 -专利权人：苏州大学
申请日： 2016-05-24 - 公布日： 2016-10-12 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供一种后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕的制备方法。该方法包括以下步骤：将编码氨基酸序列SER的DNA分子重组到家蚕染色体上，利用荧光蛋白标记筛选得到所述后部丝腺可合成和分泌亲水性丝胶蛋白的家蚕。其中，编码氨基酸序列SER的DNA分子的核苷酸序列5'端至3'端依次为家蚕丝素重链蛋白Fib‑H基因启动子、家蚕Fib‑H基因5'端信号肽编码序列、家蚕丝胶蛋白质SER3编码序列Ser3和家蚕Fib‑H本发明的方法能够使家蚕中部丝腺特异表达的亲水性丝胶蛋白基因能够同时在后部丝腺高效表达和分泌，并在家蚕成熟幼虫吐丝结茧后，获得丝素纤维中含有亲水性丝胶蛋白成分的蚕茧，进而获得纤维吸水性能得到提高的家蚕丝。
后部丝腺可合成分泌亲水性丝胶蛋白家蚕制备方法

[发明专利]一种含银蚕丝及其制备方法-CN201911341515.7在审
发明人：黄小毅;龙洛冰 -专利权人：黄小毅
申请日： 2019-12-24 - 公布日： 2020-04-10 - 主分类号： A01K67/04 文献下载
摘要：本发明涉及蚕丝制备技术领域，尤其涉及一种含银蚕丝及其制备方法。本发明含银蚕丝的制备方法，包括以下步骤：将纳米银粉分散液涂覆到桑叶表面，晾干后，喂食家蚕，从四蚕龄开始喂食直至家蚕结茧，得到含银蚕丝。本发明选用四龄蚕的家蚕，四蚕龄的家蚕丝腺发育逐渐成熟，进食较多，将表面涂覆有纳米银粉的桑叶消化后，能有更多的纳米银进入丝腺，结茧后即可得到含银蚕丝。实施例的结果表明，本发明制得的蚕丝含银量可达15ppm～100ppm。
一种蚕丝及其制备方法

[发明专利]家蚕钙离子-ATP酶基因重组表达载体及其应用-CN201310516484.0有效
发明人：赵萍;王鑫;谢康;衣启营;马三垣;夏庆友 -专利权人：西南大学
申请日： 2013-10-28 - 公布日： 2014-02-05 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种家蚕钙离子-ATP酶基因重组表达载体，用家蚕前部丝腺特异性启动子调控家蚕钙离子-ATP酶在家蚕前部丝腺特异表达，将该重组表达载体显微注射入家蚕蚕卵内获得了转基因家蚕阳性个体，对转基因家蚕阳性个体的研究发现，钙离子-ATP酶在mRNA和蛋白水平上都得到了过量表达，对转基因蚕丝纤维进行力学拉伸试验发现其力学性能得到显著提高，红外光谱分析发现转基因蚕丝纤维的结构发生了变化，因而运用本发明构建的家蚕钙离子-ATP酶基因重组表达载体可以改变蚕丝纤维的力学性能，有助于获得更加优良的蚕丝纤维。
家蚕离子 atp 基因重组表达载体及其应用

[发明专利]一种提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法及其家蚕品种-CN202210213529.6有效
发明人：徐汉福;曾文慧;欧瑶;罗琴;刘荣鹏;马艳;马静文;唐艺芸;胡杰;陈玉琴;向仲怀 -专利权人：西南大学
申请日： 2022-03-04 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明提供一种提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法及其家蚕品种，提高蚕茧中丝素蛋白含量的转基因方法通过GAL4/UAS系统，分别构建了在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm和特异性敲除BmYki和BmSd，均获得了后部丝腺增大的转基因家蚕；通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmYki能提高家蚕的丝素蛋白含量，或通过在家蚕后部丝腺中特异性敲除BmSd能提高家蚕的丝素蛋白含量，或通过在家蚕后部丝腺中特异性过表达BmDimm能提高家蚕的丝素蛋白含量。本发明根据家蚕基因组序列数据库中家蚕丝腺表达内源基因的序列密码子偏好性，对Cas9蛋白的基因序列进行了优化设计，使Cas9基因更有利于在家蚕个体丝腺中表达；通过GAL4/UAS系统及CRISPR/Cas9基因编辑技术对家蚕丝腺进行了组织特异性的敲除和过表达。
一种提高蚕茧丝素蛋白含量转基因方法及其家蚕品种

[发明专利]家蚕丝腺生物反应器及其构建方法-CN200410089203.9无效
发明人：陆长德;郭秀洋 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2004-12-08 - 公布日： 2006-06-14 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种家蚕丝胶－1基因启动子及信号肽编码区带动的家蚕丝腺生物反应器，通过构建由含有丝胶－1基因启动子及信号肽编码区的DNA片段、外源目的基因、含有丝胶－1基因polyA信号位点序列的表达框构成的丝腺特异分泌表达质粒，再将表达框架亚克隆进病毒表达系统的供体质粒，然后转化DH10BacΔEGT感受态细胞，抽提重组病毒DNA，导入载体细胞包装成重组病毒质粒，大量扩增病毒，最后注射家蚕。本发明构建的家蚕丝胶－1基因启动子及信号肽编码区带动的家蚕丝腺生物反应器，由于目标蛋白是分泌在丝蛋白中，而丝蛋白中蛋白种类只有约10种，因此，分离纯化非常方便；而且，家蚕作为高等真核生物，其丝腺一般能正确表达
家蚕生物反应器及其构建方法

[发明专利]家蚕丝腺特异表达的HLH转录调控因子BmHLH2及用途-CN200810233307.0无效
发明人：刘春;马三垣;夏庆友;林英;徐汉福;向仲怀 -专利权人：西南大学
申请日： 2008-12-11 - 公布日： 2009-07-29 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：一种家蚕丝腺特异表达的HLH转录调控因子BmHLH2，通过对丝腺基因的表达谱进行分析，并经过基因芯片制作及杂交、芯片数据分析等一系列生物技术克隆得到。本发明所获得的HLH型转录调控因子为家蚕丝腺特异表达的新型转录调控因子，荧光定量PCR实验证实其与丝腺的发育、丝腺细胞的分化有重要的联系，对BmHLH2基因的干涉研究表明，HLH型转录因子对细胞分化、器官的特化及基因的特异表达有重要的调控作用这些研究成果对于提高家蚕产丝量，改善蚕丝品质，促进蚕丝产业发展具有重要意义。
家蚕特异表达 hlh 转录调控因子 bmhlh2 用途

[发明专利]家蚕丝腺特异表达的HLH转录调控因子BmHLH1-CN200710092546.4无效
发明人：赵萍;刘春;徐汉福;夏庆友;向仲怀 -专利权人：西南大学
申请日： 2007-08-07 - 公布日： 2008-03-12 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：一种家蚕丝腺特异表达的HLH转录调控因子BmHLH1，通过对丝腺基因的表达谱进行分析，并经过基因芯片制作及杂交、芯片数据分析等一系列生物技术克隆得到。本发明所获得的HLH型转录调控因子为家蚕丝腺特异表达的新型转录调控因子，荧光定量PCR实验证实其与丝腺的发育、丝腺细胞的分化有重要的联系，对BmHLH1基因的干涉研究表明，HLH型转录因子对细胞分化、器官的特化及基因的特异表达有重要的调控作用这些研究成果对于提高家蚕产丝量，改善蚕丝品质，促进蚕丝产业发展具有重要意义。
家蚕特异表达 hlh 转录调控因子 bmhlh1

[发明专利]一种提高家蚕丝腺重量的方法-CN201910554880.X有效
发明人：时连根;沈张飞;屠振力 -专利权人：浙江大学
申请日： 2019-06-25 - 公布日： 2020-07-28 - 主分类号： A01K67/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高家蚕丝腺重量的方法。依照序列pQLTFTSGWGa，从C端(羧基端)向N端(氨基端)进行家蚕脂动激素A多肽合成；采用荧光素酶报告基因法检测合成的家蚕脂动激素A多肽活性；将家蚕脂动激素A活性多肽液过滤膜除菌，注射入5龄第2‑3天蚕腹部，桑叶饲养至成熟，丝腺重量增加。本发明方法提高家蚕丝腺重量，是没有增加蚕食桑量，通过新发现的活性多肽调控家蚕能量分配来实现的，这对于研究家蚕的能量分配机制、进一步提高家蚕经济性状等，具有积极作用。
一种提高家蚕重量方法

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