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[发明专利]一种莲叶片原生质体的制备方法及试剂盒-CN202310187465.1在审
发明人：杨星宇;梁玉婷;张思思;李娜;王宁迪;曾宪沂;李苗;刘淑超;王建强;章晓琴;康凯丽;于静亚 -专利权人：武汉市园林科学研究院
申请日： 2023-02-28 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供了一种莲叶原生质体的制备方法及试剂盒。以莲刚展开的幼嫩针叶作为材料，通过调节酶解体系、洗涤体系和纯化方法，建立莲叶原生质体制备体系。酶解液体系中1％纤维素酶、0.5％果胶酶、0.5％离析酶复配的酶解效果好；MES、山梨醇和KCl复配，可保证原生质体游离出来时外部介质与细胞本身的渗透势相同，维持原生质体的活力；CaCl2和BSA复配，能够维持原生质体膜的完整性，防止原生质体受到酶解液中蛋白水解酶的破坏，采用26％蔗糖溶液能维持原生质体渗透压稳定。该方法制备得到的原生质体数量多，活性高，且背景纯净。可以直接用于单细胞测序，为探究莲异形叶分子细胞生物学研究和发育的分子机制提供了重要基础。
一种莲叶原生质体制备方法试剂盒

[发明专利]一种茶树叶肉原生质体的分离与纯化方法-CN201711260624.7在审
发明人：刘艳丽;金孝芳;马林龙;曹丹 -专利权人：湖北省农业科学院果树茶叶研究所
申请日： 2017-12-04 - 公布日： 2018-05-29 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：一种茶树叶肉原生质体的分离与纯化方法，其以茶树种子苗嫩叶为材料，采用酶解法分离、密度梯度法纯化建立了原生质体制备体系。幼叶获取容易、原生质体分离与纯化操作简单且常年可进行，分离纯化后的原生质体得率较高、完整性好，为利用原生质体瞬时表达系统开展蛋白亚细胞定位、蛋白相互作用、基因表达调控及亚细胞器制备等研究奠定了基础。
叶肉原生质体茶树蛋白相互作用基因表达调控瞬时表达系统原生质体得率原生质体分离密度梯度法亚细胞定位原生质体制茶树种子分离纯化亚细胞器原生质体酶解法嫩叶幼叶制备蛋白研究

[发明专利]一种红椿原生质体分离与瞬时转化方法-CN202310345770.9在审
发明人：李培;李悦;宋慧云;王志;吴劲松;周瑜 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2023-04-03 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种红椿原生质体分离与瞬时转化方法。本发明首次在红椿中建立了原生质体分离和瞬时表达体系，利用本发明方法得到的红椿原生质体产量可达89.17×106个/g，活力可达92.62％，瞬时表达转化效率可达29.02％；利用红椿原生质体作受体进行转化，绿色荧光蛋白GFP能够成功表达。本发明方法可为红椿相关基因功能验证和基因改良等提供技术支持。
一种原生质体分离瞬时转化方法

[发明专利]一种木立芦荟原生质体的提取工艺-CN202310348058.4有效
发明人：刘围;张海峰;马启冠 -专利权人：山东鲁台农业科技有限公司
申请日： 2023-04-04 - 公布日： 2023-09-29 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种木立芦荟原生质体的提取工艺，属于芦荟提取技术领域，将纤维酶固定到聚合物上，然后通过酶解、过滤、离心对木立芦荟原生质体进行提取，该方法可以提高固定化酶的活性，经固定化后的酶容易保存，稳定性大为提高；并且后期原生质体易提纯，收率高；另外固定化酶经充分洗涤可以回收利用，降低了提取成本；用本方法提取的原生质体具有较高的活力。
一种木立芦荟原生质体提取工艺

[发明专利]鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-818-CN201310042607.1有效
发明人：许峰;刘宇;李登进;王守现;赵爽;耿小丽;王兰青 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2013-02-04 - 公布日： 2013-07-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-818。本发明提供的鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法，包括如下步骤：分别以待鉴别的两株花脸蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ ID No.1和2所示的PCR引物对进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，如果所述待鉴别的两株原生质体单核体的PCR产物均含有800bp-1000bp的DNA片段或均不含有800bp-1000bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型相同；如果所述待鉴别的两株原生质体单核体中的一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物含有800bp-1000bp的DNA片段，另一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物不含有800bp-1000bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型不同。
鉴别辅助花脸原生质体单核交配方法及其专用引物 is 818

[发明专利]鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-873-CN201310043620.9有效
发明人：许峰;刘宇;赵爽;李登进;王守现;王兰青;耿小丽 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2013-02-04 - 公布日： 2013-07-03 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对IS-873。本发明提供的鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法，包括如下步骤：分别以待鉴别的两株花脸蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ ID No.1和2所示的PCR引物对进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，如果所述待鉴别的两株原生质体单核体的PCR产物均含有500bp-600bp的DNA片段或均不含有500bp-600bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型相同；如果所述待鉴别的两株原生质体单核体中的一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物含有500bp-600bp的DNA片段，另一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物不含有500bp-600bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型不同。
鉴别辅助花脸原生质体单核交配方法及其专用引物 is 873

[发明专利]鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-5×16-CN201310043763.X有效
发明人：许峰;刘宇;李登进;赵爽;王守现;王兰青;耿小丽 -专利权人：北京市农林科学院
申请日： 2013-02-04 - 公布日： 2013-07-10 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明公开了鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法及其专用引物对SR-5×16。本发明提供的鉴别或辅助鉴别花脸蘑原生质体单核体交配型的方法，包括如下步骤：分别以待鉴别的两株花脸蘑原生质体单核体的基因组DNA为模板，用由SEQ ID No.1和2所示的PCR引物对进行PCR扩增，检测所得到的PCR产物的大小，如果所述待鉴别的两株原生质体单核体的PCR产物均含有500bp-800bp的DNA片段或均不含有500bp-800bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型相同；如果所述待鉴别的两株原生质体单核体中的一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物含有500bp-800bp的DNA片段，另一株待鉴别的花脸蘑原生质体单核体的PCR产物不含有500bp-800bp的DNA片段，该两株花脸蘑原生质体单核体的交配型不同。
鉴别辅助花脸原生质体单核交配方法及其专用引物 sr 16

[发明专利]一种大白菜的原生质体制备及遗传转化方法-CN201910840640.6有效
发明人：苏同兵;辛晓云;李佩荣;张凤兰;于栓仓;王单 -专利权人：北京市农林科学院;京研益农(北京)种业科技有限公司
申请日： 2019-09-05 - 公布日： 2020-12-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种大白菜的原生质体制备及遗传转化方法。本发明首先公开了一种制备大白菜的原生质体的方法，包括从大白菜黄化内叶中得到大白菜原生质体的步骤。本发明进一步公开了大白菜原生质体遗传转化方法。本发明大白菜原生质体制备方法以平头型大白菜的黄化内叶的叶肉组织为材料，相比于其他材料而言，能快速获得大量原生质体，且有效的进行遗传转化，适用于大白菜基因的外源表达和功能验证。
一种大白菜原生质体制备遗传转化方法

[发明专利]一种分离裸子植物花粉粒原生质体的方法-CN200410083788.3无效
发明人：林金星;房克凤 -专利权人：中国科学院植物研究所
申请日： 2004-10-22 - 公布日： 2006-04-26 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种分离裸子植物花粉粒原生质体的方法，其目的是提供一种较快速分离裸子植物花粉粒原生质体的方法。本发明的分离裸子植物花粉粒原生质体的方法，是用含1.5％－3％纤维素酶和0.8％－2％离析酶的酶解液酶解裸子植物花粉粒5－7小时，得到裸子植物花粉粒原生质体。本发明的分离裸子植物花粉粒原生质体的方法快速、简单易行，可获得大量具有活性的裸子植物花粉粒原生质体，具有较大的实际应用价值。
一种分离裸子植物花粉原生质体方法

[发明专利]一种基于百合原生质体的瞬时转化的方法-CN202210930529.8在审
发明人：孙红梅;何珊珊;李宏宇;宋胜利;王春夏 -专利权人：沈阳农业大学
申请日： 2022-08-04 - 公布日： 2022-12-23 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：一种基于百合原生质体的瞬时转化的方法，属于生物技术领域。以百合组培苗叶片为材料，使用酶混合液酶解分离纯化原生质体，确定了最佳甘露醇浓度0.55‑0.77 mol/L，最佳酶解时间6 h，所得到的原生质体经纯化后，利用PEG‑Ca2+将外源基因高效转入百合原生质体进行瞬时表达的方法，确定最佳瞬时转化时间为24 h。且该方法制备的原生质体产量大、活力高，利用百合原生质体为受体进行转化，绿色荧光蛋白GFP能成功表达，进一步解决了百合基因在其他植物异源表达的问题。
一种基于百合原生质体瞬时转化方法

[发明专利]一种白及遗传转化体系及其构建方法-CN202310932036.2在审
发明人：徐徳林;车晴娅;黄恻隐;李乾行;李乾坤;姜建芳;吴凤菊;赵娟娟 -专利权人：遵义医科大学
申请日： 2023-07-27 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明提供了一种白及遗传转化体系及其构建方法，属于遗传转化技术领域。包括如下步骤：(1)取白及愈伤组织，依次经暗培养、甘露醇处理、细化、酶解、分离，得到白及原生质体；(2)将磁性纳米颗粒与基因表达载体混合，构建纳米载体‑基因复合物；(3)取所述白及原生质体的溶液与所述纳米载体‑基因复合物混合，通过磁场进行诱导转化，得到转化的白及原生质体；(4)将所述转化的白及原生质体在液体培养基中暗培养，得到白及遗传转化体系。本发明从白及愈伤组织中分离白及原生质体，提高了白及原生质体的产量和活力，有利于后期成苗培育。构建的白及遗传转化体系的转化率高、稳定性高，可培育得到能稳定遗传的植株。
一种白及遗传转化体系及其构建方法

[发明专利]一种荷叶离褶伞原生质体制备及再生方法-CN201310110684.6有效
发明人：梁倩倩;席亚丽;魏生龙 -专利权人：梁倩倩
申请日： 2013-04-01 - 公布日： 2017-04-05 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种荷叶离褶伞原生质体的制备及再生的方法。该制备方法如下将菌龄72‑96h的荷叶离褶伞菌丝用0.6mol/L蔗糖渗透压稳定剂处理后、用含有质量浓度1%溶壁酶与0.5%蜗牛酶的混合酶液于30℃酶解2.5‑3h，然后自制针管过滤器分离，得到荷叶离褶伞原生质体，原生质体得率为4.79×107个/mL即5.76×105个/mg，原生质体再生率为7.81%。本发明溶壁酶和蜗牛酶的混和酶，较单一溶壁酶作用，提高了原生质体制备及再生率，而且降低了成本；本发明采用小针管小面积过滤的方法，较常规方法降低了成本，为利用原生质体技术进行荷叶离褶伞育种奠定基础。
一种荷叶离褶伞原生质体制备再生方法

[发明专利]浮萍活体原生质体制备方法-CN201610911231.7有效
发明人：杨琳;韩玉洁;刘文鑫;陆美伊;王家乐;吴迪;魏莹 -专利权人：天津师范大学
申请日： 2016-10-19 - 公布日： 2019-08-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种浮萍活体原生质体制备方法，按照下述技术方案进行：调整Datko培养基的PH至5～6，进行高压灭菌；将浮萍培养于Datko培养基上，每周继代1～2次，得到浮萍植株；在25～28℃下将浮萍植株放入甘露醇溶液中至所述浮萍植株发生质壁分离；在酶解温度为23～27℃的条件下，用组织酶解液在黑暗条件下酶解所得的浮萍植株25～30min，每间隔10～15min吹打混匀一次，得到悬浮的浮萍活体原生质体，本发明的浮萍活体原生质体制备方法可在短时间获得浮萍活体原生质体，填补了浮萍活体原生质体制备方法的空白，具有取材少、耗时短、操作简单方便和获得的原生质体浓度高的优点。
浮萍活体原生质体制浮萍植株原生质体培养基酶解原生质体浓度甘露醇溶液高压灭菌黑暗条件时间获得质壁分离酶解液吹打放入混匀继代耗时取材悬浮填补

[发明专利]一种含有依克多因的缓冲稳定剂在制备原生质体中的应用-CN202111340291.5有效
发明人：张鑫;李海军;张英华;李珍爱;王超;胡红涛;马双双;郑德强 -专利权人：山东福瑞达生物科技有限公司
申请日： 2021-11-12 - 公布日： 2022-11-01 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及原生质体制备技术领域，具体涉及一种含有依克多因的缓冲稳定剂在制备原生质体中的应用，所述缓冲稳定剂含有终浓度为0.02～0.2mol/L的依克多因和终浓度为0.1～0.2mmol/L的MgCl<本发明在缓冲稳定剂中加入小分子氨基酸衍生物依克多因，能够保护细胞在高盐、高温等极端条件下免受伤害，具有稳定渗透压、保护酶、DNA、蛋白质和生物膜的作用；且所使用缓冲稳定剂适用于植物及微生物的原生质体制备过程，可减少制备过程中原生质体的损伤，达到收到更多完整的原生质体并延长原生质体存放时间，较长时间保持活性及不破裂的目的。
一种含有依克多缓冲稳定剂制备原生质体中的应用

[发明专利]一种制备油松针叶原生质体的方法-CN201910743114.8有效
发明人：钮世辉;余峰;彭莉;马晓涵;郑嘉靖;韩方旭 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2019-08-13 - 公布日： 2023-02-07 - 主分类号： C12N9/42 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备油松针叶原生质体的方法。本发明首先公开了用于制备油松针叶原生质体的组合物，包括纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶；所述组合物中，纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶的质量比为25∶4∶10。本发明进一步公开了包含上述组合物的酶解液和成套试剂及油松针叶原生质体的制备方法。本发明以油松幼嫩针叶作为材料，通过调节酶解体系和洗涤体系，建立油松原生质体制备体系。该体系制备得到的原生质体数量及活性都较好，为后期油松功能基因的亚细胞定位、蛋白质互作、下游靶基因筛选、单细胞测序、原生质体悬浮培养等研究提供了技术保障。
一种制备油松针叶原生质体方法