[发明专利]一种重组人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法及应用

摘要

本发明涉及一种重组人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法。本发明利用遗传密码具有兼并性的原理,设计了大肠杆菌偏爱密码子,PCR扩增的人bFGFcDNA片段与原核表达载体如pBV220组装成高效表达质粒pBbFGF,转化大肠杆菌后用温度诱导bFGF基因表达,表达最达菌体总蛋白的15%。工程菌经发酵扩增,破碎菌体上清采用肝素亲和层析和凝胶排阻层析二步法纯化产品,加保护剂后制成药用冻干制剂。该制剂可治疗急性心肌梗塞等心肌缺血性疾病,作为冠心病的治疗和保健药品。

主权项

1、一种重组人碱性成纤维细胞生长因子的制备方法，包括PCR引物设计、扩增的基因、表达质粒的构建、表达产物的纯化工艺，其特性在于：(1)5′端PCR引物及扩增cDNA5′端序列为：EcoRIAGGAATTCATGCCAGCTTTGCCCGAGGATGGTGGTA(2)上述bFGFcDNA与含有PL.PR启动子的原核表达载体pBV220组装成高效表达质粒pBbFGF；(3)pBbFGF转化大肠杆菌，用温度诱导bFGF基因的表达，产物以可溶性形式存在工程菌内；(4)通过发酵技术扩增工程菌，用M9作基础培养液，温度诱导同时补加酪蛋白水解物、葡萄糖等营养成分；(5)发酵后破碎菌体，收集上清采用肝素亲和层析和凝胶排阻层析二步法纯化产品。