[发明专利]基于FRET的DNA损伤检测方法及功能蛋白在审
| 申请号： | 202210657900.8 | 申请日： | 2022-06-12 |
| 公开（公告）号： | CN115046973A | 公开（公告）日： | 2022-09-13 |
| 发明（设计）人： | 华跃进;钟世通;陆慧智;宋爽;王梁燕 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;C07K19/00;C12N9/50 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林松海 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于FRET的DNA损伤检测方法及功能蛋白。利用耐辐射奇球菌中的阻遏蛋白DdrO，将黄色荧光蛋白eYFP和青色荧光蛋白eCFP分别连接于其N端和C端，构建出具有荧光能量转移特性的功能蛋白YDC；同时利用能特异性切割DdrO的耐辐射奇球菌损伤响应调控因子PprI蛋白，将PprI蛋白的91号位点的天冬氨酸（D）突变为丙氨酸（A）后得到蛋白PprI‑D91A，以降低其不存在单链DNA时的酶切活性；当体系中存在损伤产生的单链DNA时，PprI‑D91A能够快速地酶切YDC，在440 nm激发光的作用下，YDC发射光的480 nm峰升高且530 nm峰下降；同时还提供了YDC和PprI‑D91A的氨基酸序列以及检测DNA损伤的反应体系。本发明对开发新型分子生物学的工具具有重要指导意义。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 fret dna 损伤 检测 方法 功能 蛋白 | ||
【主权项】：
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