[发明专利]一种表达双报告标签的重组副流感病毒5型

摘要

本发明的目的是提供一种共表达增强型绿色荧光蛋白(eGFP)和NanoLuc荧光素酶(NLuc)的重组副流感病毒5型(PIV5)，其中用于拯救共表达eGFP和NLuc的重组PIV5核酸片段的结构为5′‑NP‑V/P‑eGFP‑T2A‑NLuc‑M‑F‑SH‑HN‑L‑3′；其中NP、V/P、M、F、SH、HN和L为PIV5的自身基因；eGFP‑T2A‑NLuc为融合序列；其中T2A为自剪切肽序列，负责“切断”eGFP和NLuc，将二者分离。本发明通过反向遗传技术拯救的重组PIV5，既不能导致MDBK细胞病变，也不能诱导空斑形成，但对于eGFP和NLuc的表达水平较高。重组PIV5的生长动力学与NLuc的表达动力学呈正相关。eGFP‑T2A‑NLuc融合序列在重组PIV5连续20次传代过程中基因较为稳定。