[发明专利]一种长白落叶松胚性愈伤组织胚性恢复与保持的方法

摘要

本发明的目的是恢复和保持长白落叶松胚性愈伤组织的胚性—通过调节胚性愈伤组织继代培养基中激素浓度的方法。胚性愈伤组织在S+0.1mg·L‑12，4‑D+0.04mg·L‑1BA+0.02mg·L‑1KT激素条件下，继代6个月后发现胚性愈伤组织的体胚分化率急剧下降。经去除2，4‑D，逐渐降低NAA的方法恢复胚性：将胚性愈伤组织接种在每2周NAA浓度从0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg·L‑1依次降低的S培养基中进行胚性恢复培养，其中S培养基中激素还包含0.5mg·L‑1BA、0.5mg·L‑1KT。最终在S+0.2mg·L‑1NAA+0.5mg·L‑1BA+0.5mg·L‑1KT+0.5g·L‑1谷氨酰胺+0.5g·L‑1水解酪蛋白+30g·L‑1蔗糖+3g·L‑1植物凝胶培养条件下持续继代2年，胚性仍然保持良好。将胚性恢复的愈伤组织经分化培养后，体胚发生率可达100％。将发育正常的体细胞胚胎转入萌发培养基中，4周后成苗率可达46.2％。