[发明专利]一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法在审
申请号: | 201911176706.2 | 申请日: | 2019-11-26 |
公开(公告)号: | CN110734892A | 公开(公告)日: | 2020-01-31 |
发明(设计)人: | 胡俊杰 | 申请(专利权)人: | 深圳科学之门生物工程有限公司 |
主分类号: | C12N5/073 | 分类号: | C12N5/073;C12N5/0789 |
代理公司: | 11357 北京同辉知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人: | 杨敬 |
地址: | 518000 广东省深圳市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法,所述方法包括以下步骤:冲洗、过滤,将滤渣进行冷冻,胎盘剪碎,然后用酶解液消化胎盘组织;消化时间为30‑40min;将酶解组织过滤,分别得到滤液和滤渣,得到细胞悬液;然后经过搅拌混合后离心,加入培养基,得到造血干细胞。本发明将冲洗得到的滤液和滤渣进行冷冻,冷冻时间‑10℃,且每0.5天降温3℃。使得滤渣的质量得到保证,滤渣在存放的过程中,提高了滤渣内的细胞存活率,使得提取的造血干细胞可以长时间保存,造血干细胞的质量得到了保障;同时,本发明设计的造血干细胞的提取方法简单,且通过实验证明得到的干细胞存活率高,有利于推广使用。 | ||
搜索关键词: | 滤渣 造血干细胞 冷冻 胎盘 冲洗 过滤 细胞存活率 消化 时间保存 胎盘组织 细胞悬液 存活率 培养基 干细胞 酶解液 剪碎 酶解 婴儿 保证 | ||
【主权项】:
1.一种从婴儿胎盘中提取造血干细胞的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:/n一、取多个婴儿胎盘,在无菌条件下使用0.9%的氯化钠溶液逐个冲洗1-2min,将得到的冲洗液A进行检测,并标记相对应的胎盘;/n二、取其中一个检测合格的冲洗液,并将其相对应的婴儿胎盘使用0.9%的氯化钠溶液冲洗6-8min,得到冲洗液B;/n三、将冲洗液A和冲洗液B混合、过滤,得到滤渣,将滤渣进行冷冻;/n四、将步骤二得到的婴儿胎盘使用消毒后的医用剪刀剪碎,然后用酶解液消化胎盘组织,消化时间为30-40min;/n五、将步骤四得到的酶解后的组织过滤2-3次,分别得到滤液和滤渣,将滤液静置5-10小时,取出上清液,得到细胞悬液;/n六、将步骤三得到的冷冻物取出,自然融化至0-5℃,将其和步骤五中的细胞悬液混合,然后在混合物中加入步骤五中的滤渣,搅拌混合后静置2-3小时,取出上层的上清液,将得到的细胞悬液备用;/n七、将步骤六得到的细胞悬液使用离心机一次离心,取出上清液,加入培养基中1-2小时,再使用离心机二次离心,取出上清液,得到造血干细胞。/n
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