[发明专利]同时检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的荧光标记蛋白芯片制备和检测方法在审
| 申请号： | 201911097381.9 | 申请日： | 2019-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN110702925A | 公开（公告）日： | 2020-01-17 |
| 发明（设计）人： | 周斌;吴月;吴许丹;陈婧 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/569;G01N33/533;G01N21/64 |
| 代理公司： | 32218 南京天华专利代理有限责任公司 | 代理人： | 徐冬涛;竞存 |
| 地址： | 211225 江苏省南京市溧*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的Cy3标记蛋白芯片、试剂盒及检测方法。所述芯片载体为环氧基修饰的光学级玻片，其成本较低，适合产业化大规模购买和生产。本发明通过原核表达获得目的抗原，将蛋白通过晶芯Personal Arrayer 16接触式点样系统点制芯片，其特征在于每个基片至少包含一个检测区，每个检测区至少包含5个检测亚区，分别为CSFV、PPV、JEV、PRRSV、检测区及2％BSA阴性对照区。检测结果通过博奥Luxscan‑10K/A芯片扫描仪读取荧光值，在临床使用中，本发明具有特异性高、灵敏性强、能高通量检测的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 检测区 读取 高通量检测 环氧基修饰 芯片扫描仪 蛋白芯片 点样系统 检测结果 芯片载体 阴性对照 原核表达 产业化 光学级 接触式 灵敏性 试剂盒 种检测 检测 抗原 荧光 玻片 点制 晶芯 抗体 亚区 蛋白 芯片 购买 生产 | ||
【主权项】：
1.一种同时检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的Cy3标记蛋白芯片制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：/nS1：截取CSFV-E2、JEV-EDIII、PRRSV-N基因特异性抗原表位，分别将CSFV-E2、JEV-EDIII、PRRSV-N基因特异性抗原表位、PPV-VP2基因序列，克隆至pET-32a原核表达载体，转化至DH5α感受态细胞进行扩增，构建得到重组表达质粒pET-32a-E2、pET-32a-EDⅢ、pET-32a-N、pET-32a-VP2；/nS2：鉴定正确的重组质粒pET-32a-E2、pET-32a-VP2、pET-32a-EDⅢ、pET-32a-N分别转化至大肠杆菌BL21感受态，IPTG诱导，离心分离上清和包涵体，对包涵体进行洗涤、溶解、过滤后用His标签高亲和力Ni柱纯化，得到目的蛋白CSFV、PPV、JEV、PRRSV，BCA蛋白定量试剂盒测定浓度后-80℃保存；/nS3：将S2制得的重组蛋白CSFV、PPV、JEV、PRRSV稀释后，点样在芯片载体上，所述载体为环氧基片，经水合、干燥、封闭、洗涤制得检测CSFV、PPV、JEV、PRRSV抗体的Cy3标记蛋白芯片，储存备用；优选的，所述储存条件为4℃。/n
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于南京农业大学，未经南京农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201911097381.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
