[发明专利]利用非渗透抗冻剂和开放式载具冷冻保存石斑鱼胚胎方法有效
| 申请号： | 201910891749.2 | 申请日： | 2019-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN110521721B | 公开（公告）日： | 2020-09-11 |
| 发明（设计）人： | 田永胜;张晶晶;李振通;吴玉萍;李子奇;王林娜 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 彭友谊 |
| 地址： | 266071 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用非渗透抗冻剂和开放式载具冷冻保存石斑鱼胚胎方法，属于低温生物学中鱼类胚胎超低温保存技术领域，所述方法以1mol/L非渗透性糖溶液为抗冻剂，获得发育至肌节期、尾芽期或胚体转动期胚胎进行冷冻保存；开放式载具为两端开口塑料管，一端用筛绢网封口；将胚胎放入冷冻剂中处理4‑10分钟；之后将处理胚胎倒入开放式载具中，底部开口朝上垂直浸入液氮中冷冻保存；所述方法冷冻保存胚胎数量大，且不会对鱼类胚胎细胞造成“溶液损伤”，冷冻胚胎成活率和孵化率高，利用本发明方法冷冻保存云纹石斑鱼胚胎成活率可达到31.30％，孵化率可达到41.28％。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 渗透 抗冻剂 开放式 冷冻 保存 石斑鱼 胚胎 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用非渗透抗冻剂和开放式载具冷冻保存石斑鱼胚胎方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：/n(1)非渗透性抗冻剂配制：以高温灭菌过的过滤海水为基础溶液配制1mol/L非渗透性糖溶液；所述的糖为蔗糖、海藻糖或葡萄糖中的一种；/n(2)石斑鱼胚胎的收集和培养：获得云纹石斑鱼受精卵，将受精卵在22-24℃海水培养，等胚胎发育至肌节期、尾芽期或胚体转动期进行冷冻保存；/n(3)开放式胚胎冷冻载具制备:准备40-50ml左右塑料管和筛绢网，塑料管高100-116mm，直径28-30mm，塑料管两端开口，一端用筛绢网封口；/n(4)胚胎冷冻：将配制好的非渗透性糖溶液加入培养皿中，并放置一定数量云纹石斑鱼胚胎，处理4-10分钟；之后将处理胚胎倒入所述步骤(3)的开放式载具，底部开口朝上垂直浸入液氮中冷冻保存；/n(5)胚胎解冻和培养：将高温灭菌过的过滤海水置于玻璃烧杯中，并将过滤海水温度控制在25-35℃；将所述步骤(4)中含冷冻胚胎的开放式载具浸入过滤海水中，轻轻搅动并解冻；然后，将烧杯置于26℃生化培养箱中，半小时后更换海水，继续培育。/n
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