[发明专利]一种多靶点抗血栓活性物质的液相色谱-质谱筛选方法

摘要

本发明公开了一种基于干血斑样本的多靶点抗血栓物质的液相色谱‑质谱筛选方法，属于药物筛选领域。所述方法包括以下步骤：再水化干血斑样本，任选几种血栓形成过程涉及的关键靶酶的底物，将几种底物标准溶液与待筛选物质混合后加入到所述再水化的干血斑样本中，反应溶液处理后进行液相色谱‑质谱联用分析以筛选得到具有多靶点抗血栓活性的物质。本发明的筛选方法操作简单快捷、准确性高、特异性强，可连续分析大量的样品，该筛选方法能同时筛选出对一个或者几个靶酶同时抑制的抗血栓物质，且筛选出的活性物质作用靶点明确，为后续的药物开发奠定了理论基础。使用试剂易于获得，操作自动化程度高，易于临床推广及普及，商业化价值高。

主权项

1.一种多靶点抗血栓物质的筛选方法，其特征在于，所述方法以干血斑作为抗血栓相关靶酶的酶源，采用液相色谱-质谱分析进行筛选，所述的筛选方法包括如下步骤：/n(1)再水化干血斑样本：溶解干血斑样本并进行孵育，离心，吸取上清，获得干血斑样本溶液；/n(2)配制血栓形成过程涉及的关键靶酶所对应底物的标准溶液，将干血斑样本溶液与上述底物的标准溶液以及待筛选化合物混合后，使其反应完全，得到待筛选溶液；除了不添加待筛选化合物之外，同样地配制空白对照溶液；/n(3)对待筛选溶液进行除蛋白处理；/n(4)除蛋白处理后的待筛选溶液加入内标溶液后进行液相色谱-质谱分析，测得所述靶酶酶反应产物的峰面积，以抑制率为评价标准：抑制率＝1-(待筛选化合物溶液的质谱响应峰面积/空白对照溶液的质谱响应峰面积)，筛选出具有抗血栓作用的活性物质。/n