[发明专利]一种载有阿霉素的双响应脂质体微泡复合物的制备方法

摘要

本发明涉及一种载有阿霉素的双响应脂质体微泡复合物的制备方法，该法由以下步骤组成：(1)将DSPE‑PEG2000‑NHS与cRGD反应得到DSPE‑PEG2000‑cRGD；(2)将DPPC、MSPC、DSPE‑PEG2000‑cRGD和DSPE‑PEG2000‑Biotin水化反应，得到空载携cRGD肽的靶向温敏脂质体纳米粒；(3)用靶向温敏脂质体纳米粒携带阿霉素得到携cRGD肽靶向阿霉素温敏脂质体；(4)将IR780溶液加入到生物素化脂质微泡中；(5)先取所述载IR780脂质微泡加入亲和素孵育，再加入携cRGD肽靶向阿霉素温敏脂质体即得所述的双响应脂质体微泡复合物。本方法所得到的复合物既可减少阿霉素在循环中的损失，又可使阿霉素集中分布于肿瘤中心部位。

主权项

1.一种载有阿霉素的双响应脂质体微泡复合物的制备方法，该法由以下步骤组成：(1)按DSPE‑PEG2000‑NHS︰cRGD＝1︰2的摩尔比取DSPE‑PEG2000‑NHS和cRGD溶于二甲基甲酰胺中，加入DSPE‑PEG2000‑NHS和cRGD质量和0.2％的催化剂三乙胺，室温下搅拌反应4h，真空旋转蒸发去除溶剂及三乙胺后得到DSPE‑PEG2000‑cRGD；其中，所述的DSPE‑PEG2000‑NHS为分子量2000的二棕榈酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑琥珀酰亚胺酯，所述的cRGD为环状低聚肽；(2)按DPPC︰MSPC︰DSPE‑PEG2000‑cRGD︰DSPE‑PEG2000‑Biotin＝82︰8︰8︰2的摩尔比取DPPC、MSPC、DSPE‑PEG2000‑cRGD和DSPE‑PEG2000‑Biotin溶于氯仿中，常温常压旋转混合均匀；然后，室温下抽真空，旋转蒸发挥去溶剂，并在容器底部形成一层白色磷脂薄膜，真空干燥，加入pH4.0的柠檬酸盐缓冲液水化处理，待磷脂水化完全后，用孔径为100nm滤膜的脂质体挤出器挤压，得到空载携cRGD肽的靶向温敏脂质体纳米粒；其中，所述的DPPC为二棕榈酰磷脂酰胆碱，所述的MSPC为溶血磷脂，所述的DSPE‑PEG2000‑Biotin为生物素化二棕榈酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇；(3)将所得到的靶向温敏脂质体纳米粒的pH值调至7.4，然后按阿霉素︰靶向温敏脂质体纳米粒＝1︰20的质量比加入阿霉素水溶液，混匀，37℃水浴20min后，用G‑50葡聚糖凝胶柱层析，得到携cRGD肽靶向阿霉素温敏脂质体；(4)取IR‑780加入二甲基亚砜配制成浓度为2mg/mL的IR780溶液，然后按IR780溶液︰生物素化脂质微泡＝1︰100的体积比将IR780溶液加入到生物素化脂质微泡中，混匀，4℃条件下低速离心，取上层载IR780脂质微泡；其中，所述的IR780为七甲川花菁染料；(5)按携cRGD肽靶向阿霉素温敏脂质体︰亲和素︰载IR780脂质微泡＝5︰1︰5的体积比先取所述载IR780脂质微泡加入亲和素，混匀，冰上孵育30min，然后加入所述携cRGD肽靶向阿霉素温敏脂质体，轻柔混匀后4℃条件下孵育30min，洗涤，得到所述的双响应脂质体微泡复合物。