[发明专利]一种用于体内双模态成像的纳米探针及其制备方法

摘要

本发明公开了一种用于体内双模态成像的纳米探针及其制备方法，方法步骤为：(1)融合蛋白(RGD)_n‑mRFP1‑dLBT的制备；(2)融合蛋白上负载Gd³⁺，得到用于体内双模态成像的纳米探针。本发明将具有靶向功能的RGD多肽与红色荧光蛋白结合，赋予了红色荧光蛋白靶向功能，同时将可以特异性螯合Gd³⁺的短肽dLBT与红色荧光蛋白结合，制备得到的纳米探针同时具有荧光和磁共振成像的功能。

主权项

1.一种用于体内双模态成像的纳米探针的制备方法，包括如下步骤：(1)融合蛋白(RGD)_n‑mRFP1‑dLBT的制备：a.将n个编码RGD的核苷酸序列、编码mRFP1的核苷酸序列、编码dLBT的核苷酸序列和编码His标签的核苷酸序列，插入到质粒pRSET中得到重组质粒，将重组质粒导入到大肠杆菌BL21(DE3)中扩大培养，待其生长繁殖到对数生长期，停止培养，加入IPTG诱导剂，使IPTG诱导剂终浓度为0.1‑0.4mM，在180‑240rpm，20‑25℃诱导12‑24h；所述编码RGD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，n＝1‑10；所述编码mRFP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述编码dLBT的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述编码His标签的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述IPTG为异丙基硫代半乳糖苷的缩写；b.将步骤a获得的菌液离心除去上清，沉淀用超纯水重悬，离心，沉淀部分用buffer A重悬，然后破碎细菌，离心，收集上清液；c.将步骤b得到的上清液用0.45μm滤膜过滤，将过滤后的滤液加入到镍柱中，用buffer A冲洗，当测得流出液中杂蛋白的浓度小于0.01mg/mL时，用洗脱液洗脱并收集融合蛋白(RGD)_n‑mRFP1‑dLBT，透析或超滤除去盐离子，冻干后‑80℃保存，融合蛋白(RGD)_n‑mRFP1‑dLBT简称融合蛋白；(2)融合蛋白上负载Gd³⁺：将融合蛋白溶解于HEPES缓冲液，置于截留分子量为7000‑14000Da的透析袋内，将相当于融合蛋白2‑5倍摩尔的Gd³⁺加入到透析袋外部的HEPES缓冲液中，透析袋内外的HEPES缓冲液浓度一致，在300‑600rpm，温度为20‑25℃条件下，反应12‑20h；将透析袋外部换成不加Gd³⁺的HEPES缓冲液，每隔2‑3h换一次透析袋外部的HEPES缓冲液，共透析8‑12h，得到用于体内双模态成像的纳米探针。