[发明专利]基于NiFe2

摘要

本发明公开一种基于NiFe2O4纳米管的异鲁米诺全功能探针的双模式电致化学发光‑温度免疫传感器，特点是黑磷量子点（BPQDs）不仅具有良好的电催化性能，能够促进析氧反应（OER）过程，增加溶解氧的浓度，增强发光强度；而且具有优异的光热转换效率，可作为光热探针，在808 nm激光照射下，有效地将检测信号转换为热，实现对目标物的定量分析。此外，NiFe2O4纳米管（NiFe2O4 NTs）作为探针基底，极大的增加了发光试剂N‑(4‑氨丁基)‑N‑乙基异鲁米诺（ABEI）和BPQDs的负载量，进一步提高了电致化学发光和光热信号。本发明设计的双模式免疫分析方法灵敏度高，操作简单，准确度高，将其用于卵巢癌标记物，脂多糖刺激脂蛋白受体的检测，取得了良好的检测结果。在早期卵巢癌诊断和监控方面具有较为重要的价值。

主权项

1.一种基于NiFe₂O₄纳米管的异鲁米诺全功能探针的双模式电致化学发光‑温度免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）玻碳电极（GCE）首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依次用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）将4 mg的扇形金红石TiO₂介晶（SUT）分散于1 mL 浓度为10 mM的氨基离子液体 （ILs）中， 超声混合均匀，得到SUT‑ILs复合物溶液，滴加3 uL 所获得的SUT‑ILs复合物溶液于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温，制得UST‑ILs修饰电极；（3）滴加3 uL 1 wt.% 戊二醛于步骤（2）所制得的电极界面，室温下反应40 min；（4）滴加3 uL 浓度为100 ng/mL 的脂解激活脂蛋白受体单克隆抗体（Ab₁）于步骤（3）制得的修饰电极介面，室温下孵育50 min，用去离子水洗去物理吸附，制得Ab₁/UST‑ILs修饰电极；（5）滴加 3 uL 1.0 wt.%的BSA溶液到步骤（4）修饰电极界面，室温下孵育40 min，封闭电极表面上非特异性活性位点，用去离子水冲洗电极表面洗去物理吸附，储存在4 °C冰箱中备用；（6）取100 uL浓度为1.0×10^‑2 M的 N‑(4‑氨丁基)‑N‑乙基异鲁米诺 （ABEI）和100 uL 浓度为0.1 mg/mL的黑磷量子点（BPQDs），同时加入100 uL 浓度为3 mg/mL的NiFe₂O₄ 纳米管溶液中， 室温下振荡5 h,使ABEI和BPQDs吸附到NiFe₂O₄ 纳米管（NiFe₂O₄ NTs）表面，离心，洗涤,再分散制得NiFe₂O₄ NTs@ABEI@BPQDs复合物溶液；随后，在1 wt.% 的戊二醛（GLD）的辅助作用下加入100 uL浓度为100 μg/mL的HRP标记的山羊抗兔IgG (Ab₂)，室温下震荡50 min, 离心，洗涤，再分散制得NiFe₂O₄ NTs@ABEI@BPQDs‑Ab₂复合物溶液, 然后向上述溶液中加入1wt.%的BSA溶液封闭非特异性吸附位点，保存在4 °C冰箱中备用；（7）将步骤（5）所制得的修饰电极浸入到不同浓度的脂解激活脂蛋白受体 (LSR）标准溶液中并在室温下孵育40 min，用去离子水冲洗电极表面，制得LSR/Ab₁/UST‑ILs修饰电极，并保存在4 °C冰箱中备用；(8) 取3 uL步骤（6）制得的Ab₂‑NiFe₂O₄ NTs@ABEI@BPQDs‑Ab₂复合物溶液于步骤（7）所制得的修饰电极界面，室温下孵育50 min, 用去离子水冲洗电极表面,制得NiFe₂O₄ NTs@ABEI@BPQDs‑Ab₂/ LSR/Ab₁/UST‑ILs修饰电极，并保存在4 °C冰箱中备用。