[发明专利]利用磁珠纯化提高双特异性抗体的纯度的方法在审
| 申请号： | 201910525890.0 | 申请日： | 2019-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN110272496A | 公开（公告）日： | 2019-09-24 |
| 发明（设计）人： | 郁博文;刘科梅;徐珊珊;王芳;陈俏梅;王卓智;李竞;顾继杰;陈智胜 | 申请（专利权）人： | 上海药明生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/46 | 分类号： | C07K16/46;C07K1/14 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 郑权 |
| 地址： | 200131 上海市浦东新区自由*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开一种利用磁珠纯化提高双特异性抗体的纯度的方法，包括步骤：将经活化的Protein A包被磁珠与待纯化的含双特异性抗体的上清液混合，孵育，待磁珠与双特异性抗体充分结合后，通过磁分离去除上清；先用平衡缓冲液清洗磁珠，清洗2～5次；再用水清洗磁珠；将得到的清洗后的磁珠用洗脱液进行洗脱，磁分离并收集洗脱液；分离后的磁珠再用洗脱液进行洗脱1～3次，合并洗脱液，得纯化后的双特异性抗体。本发明的方法无需澄清操作，节省了时间，并减少了设备需求，可以在较短的时间内完成更高通量、更大体积样品的双特异性抗体的纯化。 | ||
| 搜索关键词： | 双特异性抗体 磁珠 洗脱液 清洗 磁珠纯化 磁分离 洗脱 大体积样品 平衡缓冲液 设备需求 用水清洗 高通量 上清液 包被 孵育 活化 去除 澄清 合并 | ||
【主权项】：
1.一种利用磁珠纯化提高双特异性抗体的纯度的方法，其特征在于，包括步骤：(1)结合：将经活化的Protein A包被磁珠与待纯化的含双特异性抗体的上清液混合，孵育，待磁珠与双特异性抗体充分结合后，通过磁分离去除上清，得到结合后的磁珠；(2)清洗：先用平衡缓冲液清洗步骤(1)得到的磁珠，所述平衡缓冲液为0.05～0.5M Tris缓冲液，pH 6.7～7.3，清洗2～5次；再用水清洗磁珠；(3)洗脱：将步骤(2)得到的清洗后的磁珠用洗脱液进行洗脱，所述洗脱液为0.05～0.5M甘氨酸溶液，pH 2.5～3.5，磁分离并收集洗脱液；分离后的磁珠再用洗脱液进行洗脱1～3次，合并洗脱液，得纯化后的双特异性抗体。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海药明生物技术有限公司，未经上海药明生物技术有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910525890.0/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 对BAFF和B7RP1具有特异性的蛋白和其用途-201910521740.2
- 许海琳;张明;G.肯南;F.W.雅各布森;W.楚吉 - 美国安进公司
- 2014-03-12 - 2019-11-12 - C07K16/46
- 本发明涉及对BAFF和B7RP1具有特异性的蛋白和其用途。本文描述对BAFF和B7RP1具特异性的双特异性蛋白、编码所述蛋白的核酸、制造所述蛋白的方法以及所述蛋白的用途。
- 双特异性T细胞活化性抗原结合分子-201910633487.X
- M·巴卡克;T·霍弗;R·霍斯;C·耶格;C·克莱因;E·默斯纳;P·乌马纳;T·魏因齐尔 - 罗切格利卡特公司
- 2014-02-24 - 2019-11-12 - C07K16/46
- 本发明涉及双特异性T细胞活化性抗原结合分子。本发明一般涉及用于T细胞活化和对特定靶细胞重定向的新颖双特异性抗原结合分子。另外，本发明涉及编码此类双特异性抗原结合分子的多核苷酸，和包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明进一步涉及用于生成本发明双特异性抗原结合分子的方法，以及在疾病治疗中使用这些双特异性抗原结合分子的方法。
- 具有延长的半衰期和增强的抗肿瘤效果的双特异性抗体-201810310970.X
- 马梵辛 - 非同（成都）生物科技有限公司
- 2018-04-09 - 2019-10-22 - C07K16/46
- 本发明公开了一种聚乙二醇化的双特异性抗体，包含(a)抗原结合片段(Fab)，其具有轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)，以及重链可变区(VH)和部分重链恒定区(CH1)；(b)融合至所述抗原结合片段(Fab)的部分重链恒定区(CH1)的C端的单域抗原结合片段(VHH)，以及(c)融合至所述抗原结合片段(Fab)的轻链恒定区(CL)的C端的聚乙二醇(PEG)。聚乙二醇化的S‑Fab(PEG‑S‑Fab)保留了肿瘤细胞和T细胞的结合。PEG‑S‑Fab增强了血浆稳定性并使S‑Fab的半衰期增加了12倍。PEG‑S‑Fab在异种移植小鼠模型中也具有更有效的肿瘤抑制效力。这些数据表明聚乙二醇化可能是增强双特异性抗体的抗肿瘤特性的有效方法。
- 抗PD-L1抗体和IL-7融合蛋白-201980001526.2
- 方磊;崔菲菲;顾海娟;王正毅;郭炳诗;臧敬五 - 天境生物
- 2019-01-25 - 2019-10-18 - C07K16/46
- 提供了具有通过肽接头与人IL‑7蛋白或其片段融合的PD‑L1抑制剂的融合分子。所公开的融合分子表现出协同的抗肿瘤效果。
- 一种具有双重可变结构域的双特异性结合的免疫球蛋白-201910505149.8
- 姜东成 - 南京华岩生物技术有限公司
- 2019-06-11 - 2019-10-15 - C07K16/46
- 本发明公开了一种具有双重可变结构域的双特异性结合的免疫球蛋白，所述的重组免疫球蛋白从氨基端到羧基端包含多肽链Vb‑(X)n‑VLa‑CL，其中，Vb为与靶目标相配对结合的由多个氨基酸组成的多肽链形成的单域结构，X为连接子，n≥0，VLa为轻链的可变结构域，CL为轻链恒定结构域，a为双特异性结合的第一抗原，b为双特异性结合的第二抗原。本发明的具有双重可变结构域的双特异性结合的免疫球蛋白，空间位阻小，具有较强的肿瘤组织穿透力；分子量与天然抗体接近，半衰期长；分子结构左右对称，不存在错配；由于单域抗体是与天然抗体的轻链融合，不会对重链的亲和力造成影响，因此与两个抗原的亲和力好。
- 具有共同轻链的双特异性抗体或抗体混合物-201510008045.8
- 徐霆;须涛;汪皛皛;李倩;逄敏洁;张慧敏;韩莉;张庆青 - 江苏康宁杰瑞生物制药有限公司
- 2015-01-08 - 2019-10-15 - C07K16/46
- 本发明涉及双特异性抗体或抗体混合物，具体涉及具有共同轻链的双特异性抗体或抗体混合物，以及所述双特异性抗体或抗体混合物的制备方法。本发明还涉及编码所述双特异性抗体或抗体混合物的核酸分子、含有该核酸分子的重组载体和重组细胞，以及所述双特异性抗体或抗体混合物的检测和定量方法。本发明通过共同轻链技术制备双特异性抗体或抗体混合物，其制备方法简单、可控，可以避免双特异性抗体中轻链的错配，对于抗体混合物，其可以在同一宿主细胞中表达，降低了混合细胞群培养的难度，更有利于放大生产。
- 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计-201280057691.8
- T.斯普雷特冯克罗伊登斯泰因;S.B.迪克西特;E.埃斯科巴-卡布雷拉;P.I.拉里奥;D.K.Y.潘 - 酵活有限公司
- 2012-11-02 - 2019-09-27 - C07K16/46
- 本发明提供的支架具有在各个结构域(例如CH2和CH3)不对称的重链，来实现超越用天然同源二聚体(对称)Fc分子的参与调节效应功能的各种Fc受体之间的选择性，和所获得的变体Fc同源二聚体的增加的稳定性和纯度。这些新分子包含设计用于改变抗体起作用和其在治疗剂中找到用途的天然方式的异质组分的复合物。
- 一种能结合两种抗原的双特异性结合的免疫球蛋白及其用途-201910524522.4
- 姜东成 - 南京华岩生物技术有限公司
- 2019-06-17 - 2019-09-24 - C07K16/46
- 本发明公开了一种能结合两种抗原的双特异性重组免疫球蛋白及其应用，该重组免疫球蛋白从氨基端到羧基端包含多肽链VHb‑CH1‑(X)n‑VLa‑CL，其中，VHb为重链的第二个可变结构域，CH1为重链恒定区的第一恒定结构域，X为连接子，n≥0，VLa为轻链第一个可变结构域，CL为轻链恒定结构域，a为双特异性结合的第一抗原，b为双特异性结合的第二抗原。该双特异性重组免疫球蛋白，是由结合第二抗原的轻链或重链直接或间接融合至第一抗原的轻链N端，不会对第一抗原的重链可变区造成位阻效应以及对Fc区介导的免疫反应造成影响；具有两条完全一样的重链，不存在重链错配问题。在制备用于疾病治疗的药物中将具有广泛的用途。
- 利用磁珠纯化提高双特异性抗体的纯度的方法-201910525890.0
- 郁博文;刘科梅;徐珊珊;王芳;陈俏梅;王卓智;李竞;顾继杰;陈智胜 - 上海药明生物技术有限公司
- 2019-06-18 - 2019-09-24 - C07K16/46
- 本发明公开一种利用磁珠纯化提高双特异性抗体的纯度的方法，包括步骤：将经活化的Protein A包被磁珠与待纯化的含双特异性抗体的上清液混合，孵育，待磁珠与双特异性抗体充分结合后，通过磁分离去除上清；先用平衡缓冲液清洗磁珠，清洗2～5次；再用水清洗磁珠；将得到的清洗后的磁珠用洗脱液进行洗脱，磁分离并收集洗脱液；分离后的磁珠再用洗脱液进行洗脱1～3次，合并洗脱液，得纯化后的双特异性抗体。本发明的方法无需澄清操作，节省了时间，并减少了设备需求，可以在较短的时间内完成更高通量、更大体积样品的双特异性抗体的纯化。
- 具有交换结合区取向的双重可变区抗体样结合蛋白-201910383252.X
- N.鲍林;C.贝尔;C.科维;C.兰格;D.李;V.米科尔;A.施泰因梅茨;E.劳 - 赛诺菲
- 2012-03-28 - 2019-09-20 - C07K16/46
- 本发明涉及具有交换结合区取向的双重可变区抗体样结合蛋白，具体地提供包含形成4个抗原结合位点的4条多肽链的抗体样结合蛋白，其中形成抗体样结合蛋白的每对多肽具有带有交换取向的双重可变结构域。本发明还提供用于制备这类抗原样结合蛋白的方法。
- 具有交换结合区取向的双重可变区抗体样结合蛋白-201910398153.9
- N.鲍林;C.贝尔;C.科维;C.兰格;D.李;V.米科尔;A.施泰因梅茨;E.劳 - 赛诺菲
- 2012-03-28 - 2019-09-20 - C07K16/46
- 本发明涉及具有交换结合区取向的双重可变区抗体样结合蛋白，具体地提供包含形成4个抗原结合位点的4条多肽链的抗体样结合蛋白，其中形成抗体样结合蛋白的每对多肽具有带有交换取向的双重可变结构域。本发明还提供用于制备这类抗原样结合蛋白的方法。
- 结合共刺激性和检查点受体的双特异性免疫调节抗体-201780060900.7
- M·博尔奈特;G·莫尔;J·德斯加尔莱斯;M·海德瓦特;C·邦松 - XENCOR股份有限公司
- 2017-08-30 - 2019-09-20 - C07K16/46
- 本发明涉及双特异性异二聚体免疫调节抗体。
- 用于治疗表达紧密连接蛋白的癌症疾病的制剂-201910208606.7
- 尤格·萨因;欧兹兰·图勒茨;克里斯蒂娜·施塔德勒;茱莉亚·霍兰;哈亚特·巴尔-马哈茂德;提姆·拜塞特;劳拉·普拉姆;菲卜瑞斯·勒加尔;阿恩·杰德瑞兹克;马库斯·菲德勒 - 拜恩科技股份公司;安斯泰来制药株式会社;TRON-美因茨约翰尼斯·古腾堡大学附属转化肿瘤医学院公益有限公司
- 2013-11-12 - 2019-08-20 - C07K16/46
- 本发明提供了结合剂和使用这些结合剂或编码其的核酸的用于治疗癌症的方法，所述结合剂包含对CD3特异以允许与T细胞结合的结合结构域和对肿瘤相关紧密连接蛋白分子特异的结合结构域。
- 一种交联抗体及其在免疫检测中应用-201510016141.7
- 潘剑用;周海涛;闵丹 - 英科隆生物技术（杭州）有限公司
- 2013-06-28 - 2019-08-20 - C07K16/46
- 本发明提供一种交联抗体，所述抗体包括由非人的TORCH病原体抗体和健康的未感染TORCH病原体的人抗体所形成的四聚体，本发明还提供了交联抗体作为替代病人阳性血液的质控品在免疫检测试剂盒中的应用。所述异源交联物生产制备简单、成本低，同时具有非常好的安全性和稳定性，可有效降低检测误差。
- 一种防治慢性牙周炎的卵黄抗体的制备方法和应用-201910305094.6
- 丁金龙;卢明磊;赵肃清;张乐恒;杨慧怡;王甜甜 - 广东工业大学
- 2019-04-16 - 2019-08-16 - C07K16/46
- 本发明公开了一种防治慢性牙周炎的卵黄抗体的制备方法，将超声破碎的牙龈卟啉单胞菌、福赛坦菌和直肠弯曲菌混匀，制备复合抗原，对蛋鸡进行初次免疫和加强免疫，共6轮，收集鸡蛋，分离并纯化特异性卵黄抗体。获得的卵黄抗体效价高，免疫效果好，可有效抑制牙龈卟啉单胞菌、福赛坦菌和直肠弯曲菌的生长，对治疗与预防慢性牙周炎明显的效果，且不会影响其他口腔无关菌群的生长，安全无害。
- 与DLL4和VEGF特异性结合的新型双靶向蛋白及其用途-201480049434.9
- 李东宪;文庆德;崔裕彬;姜庆在;金东寅;安珍衡;刘原圭;郑镇沅 - ABL生物公司
- 2014-07-08 - 2019-08-13 - C07K16/46
- 本发明涉及新型双靶向蛋白，其包含：与δ样配体4(DLL4)特异性结合的蛋白，和与血管内皮细胞生长因子(VEGF)特异性结合的抗体。
- 抗HER2-抗CD3 scFv双特异四价抗体-201410820733.X
- 宋楠萌;杨亚平;刘家望;车美英 - 北京韩美药品有限公司
- 2014-12-24 - 2019-08-06 - C07K16/46
- 本发明涉及抗HER2‑抗CD3 scFv双特异四价抗体。具体而言，本发明涉及包含抗HER2 IgG、连接片段和抗CD3 scFv的双特异四价抗体，其中抗CD3 scFv通过连接片段与抗HER2 IgG的C端连接。本发明的双特异四价抗体具有两个与HER2抗原结合的区域和两个与CD3抗原结合的区域，且包含人源化的Fc片段，免疫原性大大降低，可以采用简便的真核细胞表达系统生产，生产方便。
- 新型多价免疫球蛋白-201811561771.2
- F.鲁克;G.希姆勒;G.沃兹尼克-诺普 - F－星生物科技研究和发展有限责任公司
- 2007-06-26 - 2019-08-02 - C07K16/46
- 本发明提供与一个细胞的至少2个细胞表面分子特异性结合的多价免疫球蛋白或其部分、它们的用途和制备它们的方法，在所述免疫球蛋白的至少一个结构环区中至少一个修饰决定其与所述细胞表面分子的表位结合，其中未经修饰的免疫球蛋白不显著结合所述表位。
- 作为T细胞衔接器的双特异性IgG抗体-201811462337.9
- 亚历山大·贝特霍尔德·亨德里克·巴克;彼得·福科·万隆;敦·洛格滕伯格 - 美勒斯公司
- 2013-09-27 - 2019-07-30 - C07K16/46
- 本发明涉及作为T细胞衔接器的双特异性IgG抗体。本发明提供了人IgG双特异性抗体，其中所述抗体的一条臂与免疫效应细胞上的表位相结合，而另一条臂靶向CLEC12A或其功能等同物。还提供了针对恶性疾病例如MDS、CML或AML的这些抗体的制药用途。
- 含异二聚体抗体FC的蛋白及其制备方法-201910248855.9
- A.F.拉布里恩;J.米斯特斯;E.V.D.布雷默;J.J.内杰森;P.V.伯克尔;B.D.戈伊杰;T.文克;J.范德温克尔;J.舒尔曼;P.帕伦 - 根马布股份公司
- 2011-04-20 - 2019-07-30 - C07K16/46
- 本文公开了新的含异二聚体抗体FC的蛋白(比如双特异性抗体)和用于制备此类蛋白的新方法。
- 新型多价免疫球蛋白-201811561773.1
- F.鲁克;G.希姆勒;G.沃兹尼克-诺普 - F－星生物科技研究和发展有限责任公司
- 2007-06-26 - 2019-07-23 - C07K16/46
- 本发明提供与一个细胞的至少2个细胞表面分子特异性结合的多价免疫球蛋白或其部分、它们的用途和制备它们的方法，在所述免疫球蛋白的至少一个结构环区中至少一个修饰决定其与所述细胞表面分子的表位结合，其中未经修饰的免疫球蛋白不显著结合所述表位。
- 卷曲螺旋掩蔽的二价抗体-201780075319.2
- 维维安·庄;马修·R.·利文古德;彼得·森特 - 西雅图遗传学公司
- 2017-12-08 - 2019-07-19 - C07K16/46
- 本发明提供了包含两个轻链和重链对的二价抗体。一个或两个轻链和重链对的N末端通过包含蛋白酶裂解位点的接头连接到卷曲螺旋形成肽，所述的肽结合以·形成卷曲螺旋，其降低至少一个轻‑重链对与靶标的结合的亲和力。
- 三链抗体、其制备方法及其用途-201811525053.X
- 缪小牛;匡智慧;胡化静;倪海晴 - 信达生物制药（苏州）有限公司
- 2018-12-13 - 2019-07-05 - C07K16/46
- 本发明提供了一种新型的经人工设计的包含三条多肽链的三链抗体，其中第一多肽链包含第一重链可变结构域，第二多肽链包含第一轻链可变结构域，所述第一重链可变结构域与第一轻链可变结构域配对形成第一抗原结合位点；且第三多肽链包含单结构域第二抗原结合位点和单结构域第三抗原结合位点。本发明还提供了编码所述三链抗体的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、包含所述三链抗体的免疫缀合物和包含所述三链抗体或其免疫缀合物的药物组合物、以及所述三链抗体在疾病的免疫治疗、预防和/或诊断上的用途。
- 调节细胞表达的生物活性的结合分子-201780069440.4
- 塞西利亚·安娜·威廉明娜·热延;马克·思罗斯比;科内利斯·阿德里安·德克吕夫;林塞·克洛斯特;保卢斯·约翰内斯·塔肯;敦·洛格滕伯格 - 美勒斯公司
- 2017-09-22 - 2019-07-05 - C07K16/46
- 本发明提供了刺激细胞上的TNF受体超家族的成员的活性的装置和方法。本发明还提供了结合分子诸如包含至少两个抗原结合位点的抗体，其中第一抗原结合位点能够结合所述成员的细胞外部分，并且第二抗原结合位点能够结合第二(不同的)膜蛋白的细胞外部分。
- 共价多特异性抗体-201711415979.9
- 周桢昊;张洁 - 成都恩沐生物科技有限公司
- 2017-12-22 - 2019-07-02 - C07K16/46
- 本发明涉及具有较高的稳定性的新型共价多特异性抗体及其治疗用途，例如，在免疫疗法中的应用。
- 抗融合蛋白CEA576-669HSP70L1单克隆抗体3C1及其用途-201610128781.1
- 刘书逊;曹雪涛 - 中国人民解放军第二军医大学
- 2016-03-07 - 2019-06-18 - C07K16/46
- 本发明涉及生物医药领域，具体是一种抗融合蛋白CH的单克隆抗体3C1，产生该种抗体的杂交瘤细胞株，以及这种抗体的免疫检测用途。本发明还涉及单克隆抗体4E8和3C1在制备用于检测融合蛋白CH的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体4E8和3C1的试剂盒，以及应用此试剂盒在用于判断融合蛋白CH治疗CEA阳性肿瘤时的血清或体液浓度，应用单克隆抗体3C1检测CH融合基因修饰的免疫细胞、肿瘤细胞等哺乳动物细胞中的表达以及CEA阳性肿瘤的临床诊断。本发明所述单克隆抗体可与CH蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，具有CH蛋白免疫检测的特异性和可靠性。
- 抗融合蛋白CEA576-669HSP70L1单克隆抗体4E8及其用途-201610128738.5
- 刘书逊;曹雪涛 - 中国人民解放军第二军医大学
- 2016-03-07 - 2019-06-18 - C07K16/46
- 本发明涉及生物医药领域，具体是一种抗融合蛋白CH的单克隆抗体4E8，产生该种抗体的杂交瘤细胞株，以及这种抗体的免疫检测用途。本发明还涉及单克隆抗体4E8和3C1在制备用于检测融合蛋白CH的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体4E8和3C1的试剂盒，以及应用此试剂盒在用于判断融合蛋白CH治疗CEA阳性肿瘤时的血清或体液浓度，应用单克隆抗体4E8检测CH融合基因修饰的免疫细胞、肿瘤细胞等哺乳动物细胞中的表达以及CEA阳性肿瘤的临床诊断。本发明所述单克隆抗体可与CH蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，具有CH蛋白免疫检测的特异性和可靠性。
- 重组抗HGF/DLL4双特异性抗体、其制备方法和应用-201410128461.7
- 朱玲巧;赵杰;高宏海;洪雪娟;邓庭亭 - 三生国健药业（上海）股份有限公司
- 2014-04-01 - 2019-06-14 - C07K16/46
- 本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种重组抗人HGF/DLL4双特异性抗体、其制备方法和应用。本发明的抗人HGF/DLL4双特异性抗体既能与HGF结合，还能与DLL4结合；进一步地，本发明公开的抗体具有SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。本发明的重组抗人HGF/DLL4双特异性抗体具有良好的抗肿瘤效果。
- 重组抗HER2/PS双特异性抗体、其制备方法和应用-201410129991.3
- 朱玲巧;张成海;赵杰;郭锦林;李致科 - 三生国健药业（上海）股份有限公司
- 2014-04-01 - 2019-06-14 - C07K16/46
- 本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种重组抗HER2/PS双特异性抗体、其制备方法和应用。本发明的抗HER2/PS双特异性抗体既能与HER2结合，还能与PS结合，本发明的双特异性抗体具有良好的抗肿瘤效果。
- 抗VEGF/PIGF双特异性抗体、其制备方法及用途-201410128464.0
- 周远锋;张成海;张玉晶 - 三生国健药业（上海）股份有限公司
- 2014-04-01 - 2019-06-14 - C07K16/46
- 本发明属于生物技术领域，更具体的，本发明公开了抗VEGF/PIGF双特异性抗体、其制备方法及用途。本发明的抗VEGF/PIGF双特异性抗体既能与VEGF结合，又能与PIGF相结合，可有效抑制肿瘤内血管形成，进而更有效地抑制肿瘤生长。
- 专利分类
