[发明专利]一种蜜蜂CRISPR-Cas9基因编辑方法在审
| 申请号： | 201910510389.7 | 申请日： | 2019-06-13 |
| 公开（公告）号： | CN110157744A | 公开（公告）日： | 2019-08-23 |
| 发明（设计）人： | 苏松坤;聂红毅;耿海洋;张猛 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;C12N15/90;A01K67/033 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种蜜蜂CRISPR‑Cas9基因编辑方法，首先将Cas9蛋白与靶基因gRNA混合成终浓度均为500ng/ul的混合溶液。然后对被产下不超过1.5小时的受精卵进行注射，每颗受精卵的注射体积为1.2nl，蜂卵的显微注射在1小时内完成。接着将完成注射的蜂卵置于恒温恒湿培养箱中培养至孵化成小幼虫，蜂卵的培养条件为温度34.5℃，相对湿度为85%。最后对小幼虫进行移虫育王，得到嵌合体蜂王。本发明以蜜蜂眼色基因white为靶基因，得到有明显表型的嵌合体蜂王，另外，注射后对孵化的小幼虫进行测序，结果表明本发明有90.9%的基因编辑效率。从而建立了在意大利蜜蜂领域中敲除靶基因的基因编辑方法。 | ||
| 搜索关键词： | 蜜蜂 基因 靶基因 小幼虫 注射 蜂卵 受精卵 嵌合体 蜂王 恒温恒湿培养箱 孵化 混合溶液 培养条件 显微注射 表型 测序 敲除 移虫 育王 蛋白 | ||
【主权项】：
1.一种蜜蜂CRISPR‑Cas9基因编辑方法，其特征在于操作步骤如下：将浓度为1000 ng/μl的Cas9蛋白与浓度为1000ng/μl靶基因gRNA，按照体积比1∶1混合后，对刚产下不超过1.5小时的受精蜂卵进行显微注射，然后将显微注射后的蜂卵在培养箱中培养，至孵化成小幼虫，最后，将小幼虫进行移虫育王，得到嵌合体蜂王。
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