[发明专利]一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法在审
| 申请号： | 201910498531.0 | 申请日： | 2019-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN110373391A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 魏红江;角德灵;赵红业;赵恒;徐凯祥;李鸿辉 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京名华博信知识产权代理有限公司 11453 | 代理人： | 李中强 |
| 地址： | 650201 云南省昆*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因后并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的异种移植供体基础猪，再在此基础猪的Rosa26位点再定点插入hCD39、hTBM两个心脏功能修饰特异基因，构建出多基因修饰的心脏异种器官移植供体猪再进行功能验证，获得适合心脏异种移植的供体猪。本发明为异种心脏移植提供了可靠的供体猪，为处于终末期的心脏病患者的治疗提供了希望。 | ||
| 搜索关键词： | 供体猪 构建 心脏异种移植 修饰 体细胞核移植技术 猪胎儿成纤维细胞 动物生物技术 异种器官移植 个人源化 功能验证 基因修饰 特异基因 心脏功能 心脏移植 修饰基因 异种移植 基因 多基因 终末期 供体 敲除 位点 心脏病 心脏 治疗 | ||
【主权项】：
1.一种适合心脏异种移植供体猪的构建方法，其特征在于：具体步骤为：1）利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除引起抗原免疫排斥反应的三个主要基因在猪成纤维细胞系的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除引起抗原免疫排斥反应的GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因；2）定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因在上述GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO三基因敲除的基础上，再定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，获得GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰的猪成纤维细胞系；3）体细胞核移植和胚胎移植利用体细胞核移植技术，将筛选获得的GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因细胞系进行体细胞核移植和胚胎移植，待妊娠时取出胎儿鉴定胎儿基因的编辑情况，分离培养获得六基因修饰异种器官移植基础供体猪胎儿成纤维细胞系；4）在上述基础猪胎儿成纤维细胞的Rosa26位点再定点插入hCD39、hTBM两个心脏特异修饰基因，经细胞筛选、体细胞核移植和胚胎移植获得多基因修饰的心脏异种移植供体猪；5）对步骤4）所获得的多基因修饰的心脏异种移植供体猪进行功能验证，获得适合心脏异种移植的供体猪。
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