[发明专利]一种适合胰岛细胞及皮肤等组织异种移植供体猪的构建方法在审
| 申请号： | 201910497785.0 | 申请日： | 2019-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN110373389A | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 魏红江;郭建雄;卿玉波;贾宝瑜;成文敏;角德灵 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京名华博信知识产权代理有限公司 11453 | 代理人： | 李中强 |
| 地址： | 650201 云南省昆*** | 国省代码： | 云南;53 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种适合胰岛细胞及皮肤等组织异种移植供体猪的构建方法，属动物生物技术领域。在猪胎儿成纤维细胞的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个基因并定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，再结合体细胞核移植技术构建上述六基因修饰的异种移植供体的基础猪，在此基础猪上再敲除B2M基因，同时定点插入hCD47、A20、CTLA4‑Ig三个基因，再利用体细胞核移植技术构建多基因修饰的胰岛细胞及皮肤异种移植供体猪，再对该供体猪进行功能验证，获得适合胰岛细胞及皮肤异种移植供体猪。本发明为异种胰岛细胞及皮肤等移植供体猪的开发提供了全新的研究思路和方法，促进了猪作为异种胰岛细胞及皮肤移植的临床转化和应用。 | ||
| 搜索关键词： | 胰岛细胞 异种移植 供体猪 构建 皮肤 体细胞核移植技术 敲除 基因 皮肤移植 猪胎儿成纤维细胞 动物生物技术 个人源化 功能验证 基因修饰 修饰基因 移植供体 多基因 再利用 供体 修饰 应用 转化 开发 研究 | ||
【主权项】：
1.一种适合胰岛细胞及皮肤等组织异种移植供体猪的构建方法，其特征在于：具体步骤为：1）敲除引起抗原抗体免疫排斥反应的三个主要抗原基因在猪胎儿成纤维细胞系的基础上，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除GGTA1、CMAH、B4GalNT2三个能引起抗原抗体免疫排斥反应的基因；2）定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因在GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO三基因修饰的基础上，再定点插入hCD55、hCD59、hCD46三个人源化修饰基因，获得GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因修饰基础供体猪；3）体细胞核移植和胚胎移植利用体细胞核移植技术，将经筛选获得的GTKO/CMAHKO/B4GalNT2KO/hCD55/hCD59/hCD46六基因细胞系进行体细胞核移植，待妊娠时取出胎儿鉴定基因的编辑情况，分离培养获得六基因修饰基础供体猪胎儿成纤维细胞系；4）在基础猪胎儿成纤维细胞的基础上，再敲除B2M基因，定点插入hCD47、A20、CTLA4‑Ig三个修饰基因，利用体细胞核移植技术构建多基因修饰的胰岛细胞及皮肤等组织异种移植供体猪；5）对步骤4）所获得的多基因修饰的胰岛细胞及皮肤等组织异种移植供体猪进行功能验证，获得适合胰岛细胞及皮肤等组织异种移植的供体猪。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于云南农业大学，未经云南农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201910497785.0/，转载请声明来源钻瓜专利网。
