[发明专利]一步同源重组法在鼠伤寒沙门菌必须基因敲除中的应用有效
| 申请号： | 201910390885.3 | 申请日： | 2019-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN110157723B | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 唐田 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12N15/74 | 分类号： | C12N15/74;C12N15/90;C12N15/113;C12N15/10;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京同恒源知识产权代理有限公司 11275 | 代理人： | 赵荣之 |
| 地址： | 610041 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明涉及一步同源重组法在鼠伤寒沙门菌必须基因敲除中的应用，具体包括一种含rpsL基因的携带质粒pclone007‑rpsL、rpsL基因染色体线性打靶片段，以及将上述质粒、打靶片段用于鼠伤寒沙门菌必须基因敲除。本发明将鼠伤寒沙门菌必须基因克隆到质粒，并在质粒上对克隆基因进行功能研究较在染色体上进行研究更容易，手段和方法也更多。本发明有利于新型抗生素的研发和新型减毒沙门菌平衡致死宿主载体表达系统的研发。 | ||
| 搜索关键词： | 一步 同源 重组 伤寒 沙门 必须 基因 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.含rpsL基因的携带质粒pclone007‑rpsL，其特征在于，是通过以下方法构建得到的：(A)获得鼠伤寒沙门菌rpsL基因的启动子序列如SEQ ID NO.3所示；(B)获得含密码子优化的rpsL基因编码序列如SEQ ID NO.7所示；(C)将SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.7所示序列拼接，获得含鼠伤寒沙门菌rpsL启动子序列和经密码子优化的rpsL编码基因的序列如SEQ ID NO.8所示；(D)将SEQ ID NO.8所示序列其插入到pclone007质粒的T3TE及tonB转录终止子之间，获得含rpsL基因的携带质粒pclone007‑rpsL。
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