[发明专利]一种植物转基因细胞制备方法在审
| 申请号： | 201910360007.7 | 申请日： | 2019-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN110066828A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 卢娜 | 申请（专利权）人： | 国重科技（武汉）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/89 | 分类号： | C12N15/89;C12N5/10 |
| 代理公司： | 湖北天领艾匹律师事务所 42252 | 代理人： | 程明 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区武大*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种植物转基因细胞制备方法，包括如下步骤：从植物供体中采用酶切法获取目的基因，用PCR技术扩增目的基因，目的基因的扩增步骤为：将目的基因倒入加热容器中，调节温度，加热至90～95℃，持续1‑2分钟，DNA解链,降低温度，将温度调节到45‑55℃，并加入引物、四种脱氧核苷酸和DNA聚合酶，结合到互补DNA链,升高温度，将温度调节到70‑75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成，选取载体和目的基因构建基因载体，通过基因枪将基因载体导入受体细胞,本发明通过碱性磷酸酶抑制环化分子的产生，使得基因上的粘性末端可以和质粒载体上的粘性切口相粘结，使得基因表达载体生成，提高基因表达载体生成的数量。 | ||
| 搜索关键词： | 目的基因 基因表达载体 转基因细胞 基因载体 温度调节 种植物 扩增 引物 制备 碱性磷酸酶 脱氧核苷酸 互补DNA链 加热容器 受体细胞 粘性末端 质粒载体 互补链 基因枪 酶切法 热稳定 抑制环 供体 构建 粘结 加热 升高 合成 基因 | ||
【主权项】：
1.一种植物转基因细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：从植物供体中采用酶切法获取目的基因；S2：用PCR技术扩增目的基因，目的基因的扩增步骤为：A：将目的基因倒入加热容器中，调节温度，加热至90～95℃，持续1‑2分钟，DNA解链；B：降低温度，将温度调节到45‑55℃，并加入引物、四种脱氧核苷酸和DNA聚合酶，结合到互补DNA链；C：升高温度，将温度调节到70‑75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成；S3：选取载体和目的基因构建基因载体；S4：通过基因枪将基因载体导入受体细胞。
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