[发明专利]靶向敲除鸡IRF7基因的方法及其在疫苗制备中的应用有效
| 申请号： | 201910352557.4 | 申请日： | 2019-04-28 |
| 公开（公告）号： | CN110055254B | 公开（公告）日： | 2021-06-18 |
| 发明（设计）人： | 孙建和;程玉强;伦敏翔;严亚贤 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;C12N5/10;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 上海汉声知识产权代理有限公司 31236 | 代理人： | 庄文莉 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种靶向敲除鸡IRF7基因的方法及其在疫苗制备中的应用；基于CRISPR/Cas9，设计针对鸡IRF7基因的gRNA靶序列并连接至VK001‑02质粒，获得鸡IRF7基因打靶载体；利用脂质体将打靶载体转染至鸡成纤维细胞中。通过嘌呤霉素筛选转染成功的细胞后，经有限倍比稀释法筛选获得敲除chIRF7基因的鸡成纤维细胞。该敲除细胞系经TCID50验证表明其可使病毒滴度增高。该方法适用于鸡天然免疫模式识别受体所介导的干扰素表达通路中重要转录因子IRF7的作用及功能的研究。同时本发明所构建的敲除细胞系可使许多先天免疫通路所介导的干扰素β表达水平下调，利于病毒繁殖，可用于疫苗制备中病毒的扩增。 | ||
| 搜索关键词： | 靶向 irf7 基因 方法 及其 疫苗 制备 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR/Cas9技术敲除鸡IRF7基因的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、根据CRISPR/Cas9设计原则，设计针对鸡IRF7基因的gRNA序列；S2、构建基于CRISPR/Cas9系统的gRNA表达载体，作为鸡IRF7基因的打靶载体；S3、将打靶载体转染细胞；S4、筛选稳定细胞株；S5、测定打靶效率；S6、筛选阳性克隆株，获得鸡IRF7基因敲除细胞系。
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