[发明专利]一种碱性磷酸酶活性即时检测方法

摘要

本发明公开了一种碱性磷酸酶活性即时检测方法。利用样本溶液中的碱性磷酸酶分析物在催化焦磷酸水解反应后，后续加入的Cu²⁺因未被焦磷酸络合而能够被Cu²⁺选择性检测电极高灵敏检测的机制。该电极响应信号的大小与样本溶液中碱性磷酸酶活性的大小呈正相关，即完成碱性磷酸酶活性的即时定量检测。本发明方法简单易行，未经专业培训的操作人员也能开展实验，且不使用任何酶标仪、荧光仪、电化学工作站等大型专业分析仪器进行定量信号读取，极大降低分析成本，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种碱性磷酸酶活性即时检测方法，其具体步骤为：步骤一，将碱性磷酸酶样本溶液与焦磷酸溶液混合反应，焦磷酸分子被碱性磷酸酶特异性水解为磷酸根离子；步骤二，然后往步骤一所得混合溶液中加入Cu²⁺溶液，进行Cu²⁺‑焦磷酸络合反应；步骤三，再利用离子检测电极测定步骤二所得混合溶液中未被络合的游离Cu²⁺的浓度，所得电极响应信号大小与碱性磷酸酶样本溶液中碱性磷酸酶活性的大小呈正相关，即完成碱性磷酸酶活性的即时定量检测；所述步骤一中的水解反应通过简单的溶液混合操作来完成，未被碱性磷酸酶水解的焦磷酸能够特异性络合后续加入的Cu²⁺；所述步骤二中的络合反应通过简单的溶液混合操作来完成，未被焦磷酸特异性络合的游离Cu²⁺能够被离子检测电极定量检测，而离子检测电极对焦磷酸‑Cu²⁺络合物中的Cu²⁺不产生响应信号；所述离子检测电极为Cu²⁺选择性检测电极，是电池供电的笔式离子检测电极、电池供电的手持式离子检测电极、电池供电的台式离子检测电极和在线供电的台式离子检测电极中的一种。