[发明专利]基于IS26插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法有效
| 申请号： | 201910282847.6 | 申请日： | 2019-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN110117605B | 公开（公告）日： | 2021-02-19 |
| 发明（设计）人： | 孙坚;何玉张;李龚;刘苹;江颖琳;许金霞;刘雅红;廖晓萍 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/74;C12N15/66;C12N15/65;C12N1/21;C12R1/19;C12R1/22;C12R1/42 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 刘瑜 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于IS26插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒及菌株的方法。该自杀型质粒的构建方法如下：通过AflII和XhoI双酶切pUC26‑tpm质粒和pUC26‑RP4质粒，然后将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建p26‑RP4质粒；然后通过EcoRI和Spel双酶切p26‑RP4质粒和pBBR1MCS4‑LuxCDAB质粒，再将电泳后回收的产物用连接酶连接，构建能表达荧光的自杀型质粒。将本发明中获得的自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，得到荧光标记的大肠杆菌；最后将其与目标菌株共培养，可构建荧光菌株。本发明方法效率高，可用于构建耐药菌株、药动药效学评价或筛选药物中。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 is26 插入 序列 构建 表达 荧光 自杀 质粒 菌株 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于IS26插入序列构建能表达荧光的自杀型质粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将pUC26‑tpm质粒通过AflII和XhoI双酶切，然后进行电泳并回收片段大小为2880bp的产物，得到酶切产物I；将pUC26‑RP4质粒通过AflII和XhoI双酶切，然后电泳并回收片段大小为4702bp的产物，得到酶切产物II；再将酶切产物I和酶切产物II用连接酶连接，得到p26‑RP4质粒；(2)将步骤(1)中得到的p26‑RP4质粒通过EcoRI和Spel双酶切，然后进行电泳并回收片段大小为5715bp的产物，得到酶切产物III；将pBBR1MCS4‑LuxCDABE质粒通过EcoRI和Spel双酶切，然后电泳并回收片段大小为7332bp的产物，得到酶切产物IV；再将酶切产物III和酶切产物IV用连接酶连接，得到p26‑RP4‑lux质粒，即所述基于IS26插入序列构建的能表达荧光的自杀型质粒。
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