[发明专利]一种基于PEDV N蛋白特异性纳米抗体的阻断ELISA的检测方法及其应用有效
| 申请号： | 201910233889.0 | 申请日： | 2019-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN110016078B | 公开（公告）日： | 2020-11-17 |
| 发明（设计）人： | 肖书奇;马志倩;王天宇;田阳升;李爽 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C12N15/13;C12N15/70;G01N33/569 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 李冉 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于PEDV N蛋白特异性纳米抗体的阻断ELISA的检测方法及其应用，本发明以PEDV N蛋白包被酶标板，纳米抗体BioNb2为阻断抗体，通过待检血清样品抑制纳米抗体BioNb2与PEDV N蛋白结合，以检测血清中猪流行性腹泻病毒特异性抗体；本发明的阻断ELISA方法能够排除抗原中的杂蛋白成分的干扰而具有良好的特异性，且操作简单，易于大范围推广，在猪流行性腹泻病毒的血清诊断方面具有良好的应用前景；本发明通过大量的实验优化阻断ELISA反应条件，使该方法用于猪流行性腹泻病毒抗体检测具有良好的重复性、特异性和灵敏性，与目前已有的商品化试剂盒相比，具有简便、快速、成本低廉等优势。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 pedv 蛋白 特异性 纳米 抗体 阻断 elisa 检测 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白N的特异性纳米抗体BioNb2的构建方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)Nb2‑Avi‑Tag基因扩增以pCANTAB‑5E‑Nb2为模板，pET21b‑Nb2‑F/pET21b‑Nb2‑R为引物PCR扩增获得Nb2‑Avi‑Tag基因；(2)重组蛋白Nb2‑Avi‑Tag的原核表达和纯化将步骤(1)获得的Nb2‑Avi‑Tag基因连入原核表达载体pET21b中，转入表达菌株BL21(DE3)中进行诱导表达和纯化，获得纯化的重组蛋白Nb2‑Avi‑Tag；(3)纯化的Nb2‑Avi‑Tag重组蛋白进行生物素标记将步骤(2)获得的纯化的重组蛋白Nb2‑Avi‑Tag调整为1mg/ml，利用生物素连接酶对重组蛋白Nb2‑Avi‑Tag进行生物素标记，将标记好的纳米抗体命名为BioNb2。
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