[发明专利]利用管盖内切虫快速提取单条线虫DNA的方法

摘要

本发明公开了一种利用管盖内切虫快速提取单条线虫DNA的方法，主要是在EP管盖内加入裂解液，然后将单条线虫置于裂解液中；再用注射器针头在管盖内划一凹槽，将线虫顺放于凹槽中，接着用注射器针头垂直将线虫切为两段，将管体倒盖到管盖上，瞬时离心，并置于60℃反应5min，98℃反应2min，即得单条线虫DNA。本发明还公开了一种鉴定线虫的方法。与现有的PCR管内切虫相比，本发明方法操作更为简单，且不需要高超技巧和专业训练，切虫时间大大缩短，切虫效率高；而且与现有1‑10小时的提取时间相比，本发明方法提取时间仅15分钟，提取时间短；本发明方法重复性和稳定性好，成本低，适于大规模的筛选和鉴定。

主权项

1.一种利用管盖内切虫快速提取单条线虫DNA的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)、线虫洗涤：在灭菌的表面皿或洁净载玻片上滴加灭菌的双蒸水，用灭菌的挑针将线虫挑入到所述的双蒸水中洗涤；(2)、线虫的切割：在200μl平盖EP(Eppendorf)管的管盖内加入10μl裂解液，然后从步骤(1)已洗涤的线虫中挑取单条线虫放于该裂解液中；接着手握EP管体并将管盖平放于体式显微镜下，另一只手用注射器针头在管盖内先划出一道小凹槽，然后将线虫顺放于管盖内的凹槽内，接着用注射器针头垂直将线虫切为两段，再轻轻将管体倒盖到管盖上，掌上离心机瞬时离心，将裂解液与被切割的线虫一同收集到管底；(3)、线虫的裂解及DNA的释放：将步骤(2)中的包含被切割线虫的裂解液置于60℃反应5min，98℃反应2min，在掌上离心机上瞬时离心；即得单条线虫DNA粗提液。