[发明专利]一种快速构建转录组测序文库的方法及试剂盒有效
| 申请号： | 201910166458.7 | 申请日： | 2019-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN109957562B | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 聂俊伟;曹林;张力军;瞿志鹏;韩锦雄;叶廷跃 | 申请（专利权）人： | 南京诺唯赞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/6806;C40B50/06 |
| 代理公司： | 32218 南京天华专利代理有限责任公司 | 代理人： | 杜静;徐冬涛<国际申请>=<国际公布>= |
| 地址： | 210038 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种快速构建转录组测序文库的方法及试剂盒，将DNA第一链反转录、DNA第二链反转录以及反转录形成的双链cDNA片段进行末端补平通过一个合成体系完成，所述合成体系包括cDNA合成缓冲液(cDNA synthesize buffer)和cDNA合成酶体系(cDNA synthesize Enzyme)。本发明所述方法将传统的3)第一链cDNA反转录；4)第二链cDNA反转录；5)纯化；6)双链cDNA片段末端补平四个步骤整合在一步完成，大大减少了建库步骤，缩短了建库时间。 | ||
| 搜索关键词： | 反转录 双链cDNA片段 测序文库 合成体系 快速构建 试剂盒 转录组 建库 合成酶 第一链cDNA 一步完成 传统的 第一链 缓冲液 链cDNA 补平 整合 | ||
【主权项】：
1.一种快速构建转录组测序文库的方法，其特征在于，将DNA第一链反转录、DNA第二链反转录以及反转录形成的双链cDNA片段进行末端补平通过一个合成体系完成，所述合成体系包括cDNA合成缓冲液和cDNA合成酶体系；/n所述的cDNA合成缓冲液包括：Tris-HCl 80～100mM、MgCl2 3～7mM、KCl 50～100mM、DTT5～15mM、dNTP 4～6mM、ATP 80～120mM、随机引物0.5～2μg、DMSO 10～20％，pH 8.0～8.5；/n所述的cDNA合成酶体系包括：AMV逆转录酶75～125U、RNase H 7.5～12.5U、T4 DNA聚合酶30～60U、T4 PNK 10～20U、Klen Taq 30～40U、BSA 0.05～0.2μg。/n
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