[发明专利]一种抑制虫害的微生物生防剂的制备方法

摘要

本发明公开一种抑制虫害的微生物生防剂的制备方法，将存活的白僵菌菌株进行常规活化；将三角瓶培养基、种子罐培养基和固体培养基分别消毒处理，将白僵菌菌株稀释成孢子悬液；再将孢子悬液加入三角瓶培养基中培养达到一定浓度的孢子；将所得孢子接种在种子罐培养基中培养数小时，再将得到的孢子接种到固体培养基中培养，得到白僵菌孢子固体培养物；再分别制得粗制剂或者即精制剂。本发明的孢子收率高，稳定性强，阴凉干燥处保存1年后萌发率超过80％，既能直接使用，又能活化后喷雾使用，具有成本低，灵活方便的优点。喷施于作物表面，对农业作物的虫害的防御起到很好的效果。

主权项

1.一种抑制虫害的微生物生防剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1：将存活的白僵菌菌株在PDA培养基平板中进行常规活化；步骤2：将含有下列质量份组分的三角瓶培养基在压强不低于0.15MPa、温度121‑130℃的高压蒸汽下进行灭菌20分钟以实现消毒处理：97‑98份的无菌超纯水、1‑2份的葡萄糖、0.2‑0.8份的蛋白胨、0.1‑0.3份的磷酸二氢钾、0.02‑0.08份的七水硫酸镁；步骤3：将步骤1的白僵菌菌株从PDA培养基平板上刮下，用无菌0.05％吐温‑80稀释成浓度为每毫升10⁷的孢子悬液；再将0.1毫升孢子悬液加入步骤2灭菌后的100ml三角瓶培养基中，在转速为180r/min的摇床中振荡培养48h，温度控制在25‑28℃，至浓度达到每毫升10⁷的孢子；步骤4：在压强不低于0.1MPa、温度不低于121℃的条件下，将含有下列质量份组分的种子罐培养基进行消毒处理：97‑98.5份的无菌超纯水、0.8‑1.2份的葡萄糖、0.2‑0.8份的蛋白胨、0.2‑0.8份的豆粉、0.1‑0.3份的磷酸二氢钾、0.02‑0.08份的七水硫酸镁；步骤5：将步骤3所得孢子接种在步骤4的种子罐培养基中，接种量为1％V/V，在转速为200r/min、温度25‑28℃，通气量0.4V/Vmin的条件下培养40‑48小时；步骤6：在压强不低于0.15MPa、温度不低于121℃的条件下将含有下列质量份组分的固体培养基进行消毒处理：70‑80份的麸皮，15‑25份的稻壳，1‑3份的豆粕粉，2‑5份的玉米粉，88‑113份的水；步骤7：将步骤5中得到的孢子接种到步骤6的固体培养基中，接种量为20％W/W；将固体培养基放入深度为25‑35cm的通风培养池中进行通风补水培养50‑70h，直至产生大量孢子，得到白僵菌孢子固体培养物；步骤8：将步骤7得到的白僵菌孢子固体培养物用55℃的热风干燥后经超微粉碎，即得到粗制剂；或者，将步骤7得到的白僵菌孢子固体培养物用水浸泡1小时，再过滤，滤液经离心收集球孢白僵菌孢子，然后按下列质量百分比的组分配制成可溶性湿性分散剂，即精制剂：球孢白僵菌孢子8‑12％，十二烷基硫酸钠0.5‑1.5％，烷甲基磺酸甲醛缩合物钠盐7‑11％，抗坏血酸0.2‑0.8％，余量为硅藻土，上述各组分的总和为100％。