[发明专利]生物样品中虎杖苷及其代谢产物的检测方法

摘要

本发明公开了一种生物样品中虎杖苷及其代谢产物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对生物样品进行处理；和(2)采用超高效液相色谱‑质谱联用仪检测所述待测溶液。本发明的检测方法能够检测到生物样品中较多的虎杖苷代谢产物，从而为阐明虎杖苷的代谢途径奠定基础。

主权项

1.一种生物样品中虎杖苷及其代谢产物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)对生物样品进行处理：将C18固相萃取柱用1～3倍柱体积的甲醇进行活化，再用1～3倍柱体积的去离子水进行平衡，然后取0.2～2倍柱体积的生物样品加入所述固相萃取柱，依次以1～3倍柱体积的去离子水和0.5～2倍柱体积的甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，吹干，残渣用0.02～0.2倍柱体积的体积浓度为2vol％～7vol％的乙腈水溶液复溶，涡旋振荡，离心，取上清液作为待测溶液；其中，所述生物样品包括生物体吸收虎杖苷后的含有虎杖苷及其代谢产物的含药血浆样品和/或含药尿液样品；(2)采用超高效液相色谱‑质谱联用仪检测所述待测溶液，其中：色谱条件为：色谱柱：C₁₈色谱柱；流动相：0.1vol％甲酸水溶液A与乙腈B；柱温：40℃；梯度洗脱程序：0～2min，5vol％～20vol％B；2～15min，20vol％～54vol％B；流速：0.35mL/min；进样量：2μL；质谱条件为：电喷雾离子源负离子模式；鞘气流速：45arb；辅助气流速：25arb；毛细管电压：‑35V；喷雾电压：3.5kV；管透镜电压：‑110V；毛细管温度：325℃；傅里叶高分辨扫描范围m/z 50～800；分辨率30000；二级和三级质谱采用数据依赖性扫描，选择上一级丰度最高的2个离子进行碰撞诱导解离碎片离子扫描；归一化碰撞能量：30～40％。